流式细胞仪分析技术及应用
复旦大学肝癌研究所/生物医学研究院刘银坤
流式细胞仪与显微镜的区别
区别流式细胞仪显微镜
光源激光自然光、灯光
对象细胞、生物粒子细胞、组织等
承载工具鞘液及流动室载玻片
检测信号光学信号形态及染色
放大方式PMT、放大电路目镜×物镜、光学放大
统计计算机，5000人工，200
结果多参数，综合分析简单，单参数
流式细胞术的定义
流式细胞术(flowcytometry,FCM)是以流式
细胞仪为检测手段的一项能快速、精确的对
单个细胞理化特性进行多参数定量分析和分
选的新技术。
流式细胞术的特点
流式细胞术最大的特点是能在保持细胞及
细胞器或微粒的结构及功能不被破坏的状态下，
通过荧光探针的协助，从分子水平上获取多种
信号对细胞进行定量分析或纯化分选。
细胞不被破坏，测量快速、大量、准确、灵敏、定量
流式细胞技术的原理和构造
流式细胞仪是测量染色细胞
标记物荧光强度的细胞分析仪，
是在单个细胞分析和分选基础
上发展起来的对细胞的物理或
化学性质（如大小、内部结构、
DNA、RNA、蛋白质、抗原等）
进行快速测量并可分类收集的
高技术。
流式细胞仪常检测的细胞特性
细胞组成细胞功能
大小细胞表面/胞浆/核--特异性抗原
粒度细胞活性
DNA,RNA含量胞内细胞因子
蛋白质含量激素结合位点
钙离子,PH值,膜电位酶活性
流式细胞仪工作原理
?更好的单色性与激发效率的激光作为激发光源
?利用荧光染料与单克隆抗体技术结合的标记技
术，保证检测的灵敏度和特异性；
?用计算机系统对单个细胞的多个参数信号进行数
据处理分析，保证了检测速度与统计分析精确性。
一、流式细胞仪的基本结构：
（1）液流系统
（2）光学系统
（3）数据处理系统
（1）液流系统
?由样本和鞘液组成
?待测细胞单个细胞的悬液荧光染料标记的
单抗对其染色受清洁气体压力从样品管进
入流动室形成样本流
?鞘液：辅助样本流被正常检测的基质液。主要作用是
包裹样本流的周围，保持样本流中细胞处于喷嘴中心
位置，防止其靠近孔壁而阻塞喷孔。
FCM的液流系统（如
何形成单个细胞流）
鞘液管
样本管
液流系统示意图
喷嘴
鞘液
Fluorescence
signals
Focused