RecombinantDNA
基因工程-重组DNA
?基础知识
?克隆载体及基因克隆
?cDNA文库/GenomicDNA文库
?表达载体
?重组DNA技术的应用
Termsincommonuse
?DNA/Genecloning基因克隆
?Vector载体(一般为质粒DNA)
?Geneengineering基因工程
?Genemanipulation基因操纵
?RecombinantDNA重组DNA
?Transgene/Transgenicanimal(plant)
转基因/转基因动(植)物
?cDNA/GenomicDNAlibrary
cDNA/基因组(总)DNA文库
基本概念
?克隆（clone）克隆化（cloning）
?DNA克隆（DNAcloning）
分子克隆（molecularcloning）
重组DNA（recombinantDNA）
?工具酶（toolenzymes）
restrictionenzymes（Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ）
?目的基因（targetgene)
?基因载体（vectors）
DNA克隆
（基因克隆或重组DNA）
应用酶学的方法,在体外将各种来源的
遗传物质（DNA）与载体DNA连接成具有
自我复制能力的DNA分子，再通过转化或
转染宿主细胞，筛选出含有目的基因的转
化子细胞，经扩增提取获得大量同一DNA
分子。
基因克隆（分子克隆molecular
cloning）通过体外重组技术,将
一段目的DNA经切割、连接插入适
当载体，并导入受体细胞，扩增形
成大量子代分子的过程。
基因克隆的核心体外重组
(Recombination):人工将一段目
的DNA插入一个载体的过程。
?1973Cohen第一例成功的克隆实验
?1978Genentech公司人胰岛素世界上第一种基因工
程蛋白药物
?1982第一个基因工程药物--重组人胰岛素在英、美获
准使用
?1985第一批转基因家畜（兔、猪和羊），中国转基因
鱼
?1993基因工程西红柿在美国上市
?1997英国罗斯林研究所多莉羊
?1999.9中国获准加入人类基因组计划，负责测定人类
基因组全部序列的1%
?2000.6.26科学家公布人类基因组工作草图
?2001.2.11公布人类基因组基本信息
?生物技术工程：基因工程、蛋白质工程、酶工程、细
胞工程
抑制和调节多
种激素的作用
人体生长激素释放激素(SS)
从动物脑中提取:9升大肠杆菌
培养液
5mg50万只羊脑
基因工程
基因克隆的技术路线
目的基因载体
体外重组
重组子（杂合DNA）
转化
受体细胞
筛选阳性克隆
大量扩增，获得子代DNA
分