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检测(jiǎncè)组织中的脂质概要
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一、实验(shíyàn)目的
1、尝试用化学试剂检测生物组织中的脂质
2、识记用于脂质鉴定的试剂及产生(chǎnshēng)的特定颜色
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二、实验(shíyàn)原理
脂肪和类脂(磷脂、糖脂、固醇脂等)统称为脂类。它是构成人体组织(zǔzhī)的正常成分,不溶于水而易溶于酒精、乙醚、氯仿等脂溶剂中。在化学组成上,脂类属于脂肪酸的酯或与这些酯有关的物质。脂类的主要功能是氧化供能。
脂肪主要存积于脂肪组织(zǔzhī)中,并以油滴状的微粒存在脂肪细胞浆内。
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在病理检验中,脂类染色法最常用(chánɡyònɡ)以证明脂肪变性,脂肪栓子以及肿瘤的鉴别。脂类染色使用最广泛的染料是苏丹染料,最常用(chánɡyònɡ)的有苏丹Ⅲ,苏丹Ⅳ,苏丹黑及油红O等。脂肪被染色,实际上是苏丹染料被脂肪溶解吸附而呈现染料的颜色。经研究认为组织中脂质在液态或半液态时,对苏丹染料着色效果最好。根据这一原理,适当提高温度(37℃-60℃)对组织切片染色效果是有好处的。
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脂类染色,用冰冻或石蜡切片,以水溶性封固剂封固,如甘油、明胶和阿拉伯糖胶等。
脂肪(zhīfáng)可以被苏丹Ⅲ染液染成橘黄色或橙红色(或被苏丹Ⅳ染液染成红色),胆脂素呈淡红色,脂肪(zhīfáng)酸不着色,细胞核呈蓝色。
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三、实验(shíyàn)材料
做脂肪的鉴定实验。应选富含脂肪的种子,以花生种子为最好,实验前一般要浸泡3~4小时(xiǎoshí)(也可用蓖麻种子)。
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四、实验(shíyàn)用具
双面刀片、试管(shìguǎn)(最好用刻度试管(shìguǎn))、试管(shìguǎn)夹、试管(shìguǎn)架、大小烧杯、小量筒、滴管、酒精灯、三脚架、石棉网、火柴、载玻片、盖玻片、毛笔、吸水纸、显微镜
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五、实验(shíyàn)试剂
苏丹(sūdān)Ⅲ或苏丹(sūdān)Ⅳ染液
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六、方法(fāngfǎ)步骤
操作方法
注意问题
解释
花生种子浸泡、去皮、切下一些子叶薄片,将薄片放在载玻片的水滴中,用吸水纸吸去装片中的水。
干种子要浸泡3~4小时,新花生的浸泡时间可缩短。
因为浸泡时间短,不易切片;浸泡时间过长,组织较软,切片不易成形。切片要尽可能薄些,便于观察。
在子叶薄片上滴2~3滴,染色1分钟。
染色时间不宜过长。
用吸水纸吸去薄片周围染液,用50%酒精洗去浮色,吸去酒精。
酒精用于洗去浮色,不洗去浮色,会影响对橘黄色脂肪滴的观察。同时,酒精是脂溶性溶剂,可将花生细胞中的脂肪颗粒溶解成油滴。
用吸水纸吸去薄片周围酒精,滴上1~2滴蒸馏水,盖上盖玻片。
滴上清水可防止盖盖玻片时产生气泡。
低倍镜下找到花生子叶薄片的最薄处,可看到细胞中有染成。
时间一长,油滴会溶解在乙醇中。
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七、实验(shíyàn)现象
现象(xiànxiàng)描述:
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八、思考(sīkǎo)与讨论
讨论:
思考题:
1、花生种子切片为何要薄?
2、转动细准焦螺旋时,若花生切片的细胞总有一部分清晰,另一部分模糊,其原因(yuányīn)一般是什么?
3、脂肪鉴定中乙醇作用?
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