T/HXCYXXX—2025
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ICS65.020
B20
团体标准
T/HXCYXXX-2025
紫花苜蓿维生素E测定技术规程
TechnicalSpecificationforDeterminationofVitaminEinMedicagoSativa
（征求意见稿）
2025-XX-XX发布2025-XX-XX实施
北京华夏草业产业技术创新战略联盟发布
紫花苜蓿维生素E测定技术规程
1范围
本文件规定了紫花苜蓿中维生素E测定技术的术语和定义、原理、试剂和材料、仪器设备、分析步骤、分析结果的表述、精密度等内容。
本文件适用于紫花苜蓿中维生素E的测定。
2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法。
3术语和定义
3.1紫花苜蓿MedicagoSativaL.
紫花苜蓿（MedicagoSativaL.）为豆科苜蓿属多年生草本植物，根系发达，有“牧草之王”的美誉。
3.2维生素EVitaminE
维生素E（VitaminE）是生育酚类物质的总称，是一种金黄色或者淡黄色的油状物，在动物机体中无法合成，是最主要的抗氧化剂之一。
4原理
试样中的维生素E经甲醇：三氯甲烷溶液提取、浓缩后，C30反相液相色谱柱分离，荧光检测器检测，外标法定量。
5试剂和材料
除另有说明外，所用试剂均为分析纯，提取用水应符合GB/T6682中三级水的要求。
5.1试剂
5.1.12，6-二叔丁基对甲基苯酚：简称BHT。
5.1.2无水乙醇。
5.1.3三氯甲烷。
5.1.4甲醇：色谱纯。
5.2试剂配制
5.2.1甲醇：三氯甲烷溶液（2：1，V：V）：称取0.015g2，6-二叔丁基对甲基苯酚于烧杯中，加入100mL甲醇和50mL三氯甲烷，混匀备用。
5.2.2甲醇：水溶液（95：5，V：V）：量取475mL甲醇，加入25mL水，混匀备用。
5.3标准品
5.3.1α-生育酚（C29H50O2，CAS号：10191-41-0）：纯度≥95%，或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质。
5.3.2β-生育酚（C28H48O2，CAS号：148-03-8）：纯度≥95%，或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质。
5.3.3γ-生育酚（C28H48O2，CAS号：54-28-4）：纯度≥95%，或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质。
5.3.4δ-生育酚（C27H46O2，CAS号：119-13-1）：纯度≥95%，或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质。
5.4标准溶液配制
5.4.1维生素E标准储备溶液（1.00mg/mL）：称取4种生育酚异构体标准品各50.0mg（准确至0.1mg），用无水乙醇溶解于50mL容量瓶中，定容至刻度，此溶液浓度约为1.00mg/mL。将溶液转移至棕色试剂瓶中，密封后，在-20℃避光保存，有效期6个月。临用前将溶液回温至室温，并进行浓度校正（校正方法参见附录A）。
5.4.2维生素E标准溶液中间液（10.00μg/mL）：准确吸取维生素E标准储备溶液各1.00mL于同一100mL容量瓶中，用甲醇：水溶液（95：5，V：V）定容至刻度，此溶液中维生素E各生育酚浓度为10.00μg/mL。
5.4.3维生素E标准系列工作溶液：分别准确吸取维生素E混合标准溶液中间液0.20mL、0.50mL、1.00mL、2.00mL、5.00mL、10.00mL于10mL棕色容量瓶中，用甲醇：水溶液（95：5，V：V）定容至刻度，该标准系列中4种生育酚浓度分别为0.20μg/mL、0.50μg/mL、1.00μg/mL、2.00μg/mL、5.00μg/mL、10.00μg/mL。
5.5材料
5.5.1有机系滤膜（孔径为0.45μm）。
6仪器设备
6.1天平：感量为0.0001g。
6.2离心机：转速14000g。
6.3旋涡混合器。
6.4旋转蒸发仪。
6.5紫外分光光度计。
6.6高效液相色谱仪：带荧光检测器。
7分析步骤
7.1试样制备
称取50mg新鲜叶片在液氮中研磨至均匀一致，储存于离心管中，样品现用现制备。
7.2提取
向储存样品的离心管中加入1mL甲醇：三氯甲烷溶液（2：1，V：V），室温避光放置20min。然后加入300μL三氯甲烷和