第三章
基因工程总复习
本章重难点汇总1.分析作为基因工程中三种基本工具各自的作用。2.分析基因工程载体需要具备的条件。3.运用DNA的理化性质，分析DNA的粗提取与鉴定的原理。1.简述PCR的原理、条件及过程。2.简述基因表达载体的组成及构建过程。1.实例分析将目的基因导入受体细胞的方法及目的基因的检测与鉴定。2.构建基因工程的基本操作流程。3.基于DNA片段的扩增及电泳鉴定，尝试进行PCR的基本操作并用电泳鉴定PCR的产物。1.基于基因工程在农牧、医药和食品等行业应用的实例，说明基因工程给社会带来的巨大进步。2.基于基因工程在各方面发展的前景，理性看待基因工程的安全性。1.举例说出蛋白质工程崛起的缘由。2.简述蛋白质工程的基本原理。
3.基因工程的基本操作程序目录2.DNA的粗提取与鉴定1.重组DNA技术的工具5.基因工程的应用6.蛋白质工程的原理和应用4.DNA片段的扩增及电泳鉴定
任务一重组DNA技术的工具
一、基因工程的理论基础①不同生物的DNA能够进行拼接吗？能。①因为几乎所有生物的DNA分子都是由4种脱氧核苷酸组成的双螺旋结构②DNA分子都遵循碱基互补配对原则这为不同生物的DNA拼接提供物质基础。②Bt基因在棉花细胞中表达的产物是否还和原来相同也具有抗虫性呢？同样具有抗虫性。①基因是控制生物性状的遗传物质是结构和功能的基本单位②几乎所有生物共用一套遗传密码，都遵循中心法则这为一种生物的基因在其他生物体内正常表达提供可能性。
1.概念：基因工程是指按照人们的愿望，通过转基因等技术，赋予生物新的遗传特性，创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。由于基因工程是在DNA分子水平上进行设计和施工的，因此又叫作重组DNA技术。二、基因工程2.归纳深化概念别名重组DNA技术或基因拼接技术或转基因技术操作对象基因操作环境生物体外原理基因重组操作水平DNA分子水平基本过程剪切→拼接→导入→表达结果符合人们需要的新的生物类型和生物产品优点克服远缘杂交不亲和障碍、定向改造生物性状基因工程操作导致的基因重组与有性生殖中的基因重组的主要区别是什么？有性生殖中的基因重组是随机的，并且只能在同一物种间进行重组；基因工程可以实现遗传物质在不同物种间进行重组，并且方向性强，可以定向地改变生物的性状。
准确切割DNA分子的“分子手术刀”将DNA片段再连接起来的“分子缝合针”将体外重组好的DNA分子导入受体细胞的“分子运输车”三、重组DNA技术的基本操作工具分子手术刀—限制性内切核酸酶（简称：限制酶）切割DNA分子的工具是限制性内切核酸酶，简称限制酶。①来源：主要是从原核生物中分离纯化出来的。②种类：迄今分离的限制酶有数千种③作用：能够识别双链DNA分子的特定核苷酸序列，并使每一条链中特定部位的磷酸二酯键断开。
分子手术刀—限制性内切核酸酶（简称：限制酶）④识别序列：大多数限制酶的识别序列由6个核苷酸组成，也有少数限制酶的识别序列由4个、8个或其他数量的核苷酸组成。⑤识别序列特点：回文序列中轴线两侧的碱基反向对称重复排列切割的是什么？两个脱氧核苷酸之间的磷酸二酯键，氢键自动断开
分子手术刀—限制性内切核酸酶（简称：限制酶）限制酶EcoRⅠ的酶切过程533553355335黏性末端黏性末端当限制酶在它识别序列的中心轴线两侧将DNA分子的两条链分别切开时，产生的是粘性末端
5335分子手术刀—限制性内切核酸酶（简称：限制酶）限制酶SmaⅠ的酶切过程当限制酶在它识别序列的中心轴线处切开时，产生的是平末端53355335平末端平末端
1.作用：将双链DNA片段“缝合”起来，恢复被限制酶切开的两个核苷酸之间的磷酸二酯键。分子缝合针—DNA连接酶2.种类：一类是从大肠杆菌中分离得到的，称为E.coliDNA连接酶一类是从T4噬菌体中分离得到的，称为T4DNA连接酶E.coliDNA连接酶链接具有平末端的DNA片段的效率要远远低于T4D