ICS11.220B41
SZDB/Z
深圳市标准化指导性技术文件
SZDB/Z206-2016
H7N9亚型禽流感病毒抗体血凝抑制试验检测方法
ProtocolofHaemagglutinationInhibitionTestforDetectionofAvian
InfluenzaVirusAntibodySubtypeH7N9
2016-11-15发布2016-12-01实施
深圳市市场监督管理局发布
I
SZDB/Z206-2016
目次
前言 II
1范围 1
2规范性引用文件 1
3原理 1
4术语与缩略语 1
5仪器与试剂 1
6生物安全要求 2
7样品采集和处理 2
8微量血凝（HA）试验测定抗原效价和回测抗原操作方法 2
9微量血凝抑制（HI）试验 3
附录A（规范性附录）常用试剂配制 5
附录B（资料性附录）H7N9血凝及血凝抑制试验结果记录表格 6
II
SZDB/Z206-2016
前言
本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。本标准的附录A为规范性附录。
本标准由深圳市检验检疫科学研究院提出。
本标准起草单位：深圳市检验检疫科学研究院、深圳出入境检验检疫局动植物检验检疫技术中心、江西出入境检验检疫局、珠海出入境检验检疫局。
本标准主要起草人：林庆燕、孙洁、廖立珊、秦智锋、杨俊兴、吕建强、唐金明、杨春华、罗宝正。
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SZDB/Z206-2016
H7N9亚型禽流感病毒抗体血凝抑制试验检测方法
1范围
本标准规定了H7N9亚型禽流感病毒抗体血凝抑制试验的操作规程和技术要求。本标准适用于H7N9亚型禽流感病毒抗体检测、监测和流行病学调查。
2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB/T18088出入境动物检疫采样
GB/T18936高致病性禽流感诊断技术
GB19442高致病性禽流感防治技术规范
3原理
血凝抑制（HI）试验的原理是禽流感病毒表面具有的血凝素蛋白能和红细胞浆膜上的唾液酸受体物质特异结合，当一定量病毒和适当比例的红细胞混合后发生凝集，此为血凝（HA）现象。而用禽流感病毒特异性抗体和病毒作用，干扰了病毒和红细胞的结合从而抑制了血凝，此为血凝抑制（HI）现象。本标准通过HA-HI试验，用已知的H7N9亚型禽流感病毒来检查被检血清中的相应的H7N9亚型禽流感病毒抗体和滴定相应的H7N9亚型禽流感病毒抗体的含量。
4术语与缩略语
下列术语与缩略语适用于本文件。
AIV：avianinfluenzavirus，禽流感病毒。HA：haemagglutination，血凝。
HAU：haemagglutinationunit，凝集单位。
HI：haemagglutinationinhibition，血凝抑制。PBS：pH7.2,0.01mol/L磷酸盐缓冲溶液。
5仪器与试剂
5.1仪器与材料
主要的仪器与材料如下：a)台式冷冻离心机；
b）96孔V形微量反应板；
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SZDB/Z206-2016
c）微型振荡器；
d)冰箱（2℃~8℃,-20℃,-80℃);
e)单通道可调微量移液器(10μL～100μL、100μL～1000μL)及相应滴头；
f)多通道可调微量移液器(10μL～100μL)及相应滴头；
g)45。倾斜的白色判读板。5.2试剂
5.2.1试剂级别
除另有规定，本方法试验用水应符合GB/T6682规定的一级水，所用化学试剂均为分析纯。
5.2.2标准抗原及标准阴、阳性血清
禽流感病毒H7N9亚型血凝抑制抗原、禽流感病毒H7亚型（H7N9株）阳性血清和阴性血清由哈尔滨兽医研究所提供。置-20℃或更低温度冻存。使用时取适量配制成工作液，避免多次冻融。
5.2.3其它试剂
a)0.01mol/LPBS（pH7.2～7.4，配制方法见附录A）；
b)阿氏液（Alsevers液）（配制方法见附录A）；
c)1%鸡红细胞悬液（配制方法见附录A）。
6生物安全要求
样品采集、样品处理及检测过程所涉及的实验操作，应参照GB19489的规定