ICS11.220B41
SZDB/Z
深圳市标准化指导性技术文件
SZDB/Z209-2016
A型流感病毒荧光微球试纸条快速检测方法
ProtocolofRapidImmunoassayfortheDetectionofInfluenzaAVirus
2016-11-22发布2016-12-01实施
深圳市市场监督管理局发布
I
SZDB/Z209-2016
目次
前言 II
1范围 1
2规范性引用文件 1
3原理 1
4试剂和材料 1
5器材和设备 1
6样品采集与处理 2
7荧光微球免疫层析试纸条检测操作 2
8结果判定 2
9A型流感病毒现场检测阳性结果的处理 3
附录A(规范性附录)常用试剂配制 4
附录B(资料性附录)原理及结果判定示意图 5
II
SZDB/Z209-2016
前言
本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。
本文件的某些内容有可能涉及专利，应按照专利法的规定执行。本文件的发布机构不应承担识别这些专利的责任。
本标准起草单位：深圳市检验检疫科学研究院、清华大学深圳研究生院、中华人民共和国深圳出入境检验检疫局动植物检验检疫技术中心、深圳市疾病预防控制中心、深圳市亿立方生物技术有限公司、中华人民共和国江西出入境检验检疫局检验检疫技术中心。
本标准主要起草人：孙洁、陈兵、曾少灵、秦智锋、马岚、吴峰、杨春华、房师松、邓继岿、廖立珊、唐金明、詹爱军、卢体康、刘建利、陶虹、林庆燕、吕建强、杨俊兴、曹琛福、张彩虹、阮周曦。
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SZDB/Z209-2016
A型流感病毒现场超敏荧光微球试纸条检测方法
1范围
本标准规定了A型流感病毒荧光微球快速免疫层析检测技术及操作方法。
本标准适用于A型流感病毒的流行病学调查、大规模筛查检测和疫情监测，可用于现场超敏检测组织样品、拭子悬液及粪便样品等。
2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法
GB/T18088出入境动物检疫采样
GB19489实验室生物安全通用要求
3原理
本方法的检测原理见附录B，是采用荧光微球标记技术，应用膜免疫层析双抗体夹心法来检测样品中的A型流感病毒。其主要原理是：将荧光微球标记特异的A型流感病毒单抗，将另一种特异的A型流感单抗先固定于硝酸纤维素膜的检测区带(T线)，将抗鼠IgG抗体固定于硝酸纤维素膜的质控区带(C线)。在加入待测样品后，基于侧流免疫层析原理，样品中的A型流感病毒，与荧光微球标记A型流感病毒特异性单抗结合后，流经检测区，与另一种特异性A型流感病毒单抗结合，形成抗体-抗原-荧光微球标记抗体免疫复合物；同时，剩余的荧光微球标记A型流感病毒抗体在质控区与抗鼠IgG抗体结合，形成抗体-荧光微球标记抗体复合物；在紫外光激发下，检测区出现荧光条带为阳性结果，未出现荧光条带为阴性结果，质控区的检测结果则作为该测定方法的质控内标，需出现荧光条带，见附录B。
4试剂和材料
a)水：符合GB/T6682中一级水的规格；
b)A型流感病毒阳性对照物：由国家流感参考实验室或哈尔滨兽医研究所提供；
c)动物阴性对照物为SPF动物的拭子样本或组织悬液；临床阴性对照物为学校体检正常人群；空白对照为样品处理液；
d)拭子样品处理液：见附录A.1；
e)组织样品处理液：见附录A.2。
5器材和设备
冰箱；组织研磨器；低温高速离心机；微量移液器；计时器；紫外分析仪和荧光试纸检测仪。
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SZDB/Z209-2016
6样品采集与处理
6.1禽类样品
a)拭子样品：将灭菌的棉拭子插入禽类的咽喉、泄殖腔中轻轻搅动，取出后放入含拭子样品处理液的离心管中混匀。
b)组织样品：取0.5g待检组织，研磨均匀后，用1mL组织样品处理液悬浮，10000g离心5min，取上清用于检测。
6.2哺乳类动物样品
a)拭子样品：将灭菌的棉拭子插入鼻腔，轻轻擦拭3次～5次并慢慢旋转，然后取出拭子并放入盛有样品处理液的离心管中混匀。
b)组织样品：采