WB实验试题及答案
单项选择题（每题2分，共10题）
1.WB实验中用于分离蛋白质的技术是（）
A.离子交换层析B.凝胶过滤C.SDSD.亲和层析
2.转膜时常用的膜是（）
A.尼龙膜B.PVDF膜C.硝酸纤维素膜D.以上都可
3.封闭液的主要作用是（）
A.固定蛋白质B.防止非特异性结合C.促进抗体结合D.溶解蛋白质
4.一抗孵育的最佳温度通常是（）
A.4℃B.25℃C.37℃D.56℃
5.WB实验中常用的显色方法不包括（）
A.化学发光法B.放射性自显影C.酶标显色法D.荧光显色法
6.蛋白质样品在进行SDS前需要进行（）处理
A.透析B.超滤C.变性D.复性
7.分离大分子蛋白质宜选用（）浓度的聚丙烯酰胺凝胶
A.高B.低C.中等D.都可以
8.以下哪种物质可作为SDS中的电泳缓冲液成分（）
A.Tris-HClB.PBSC.柠檬酸D.醋酸
9.二抗的作用是（）
A.识别抗原B.识别一抗C.标记抗原D.标记一抗
10.转膜时间过长可能导致（）
A.蛋白质未转到膜上B.蛋白质转移过度C.膜破裂D.无影响
答案：1.C2.C3.B4.A5.B6.C7.B8.A9.B10.B
多项选择题（每题2分，共10题）
1.WB实验中可能用到的试剂有（）
A.SDSB.考马斯亮蓝C.脱脂奶粉D.辣根过氧化物酶标记二抗
2.影响SDS分离效果的因素有（）
A.凝胶浓度B.电泳电压C.样品上样量D.缓冲液pH
3.转膜过程中需要注意的事项有（）
A.膜与凝胶的贴合B.转膜装置的正负极C.转膜时间D.转膜温度
4.封闭液的成分可以是（）
A.牛血清白蛋白B.明胶C.吐温20D.蔗糖
5.选择一抗时需要考虑的因素有（）
A.抗体的特异性B.抗体的效价C.抗体的来源D.抗体的浓度
6.以下哪些属于WB实验的步骤（）
A.蛋白质提取B.凝胶制备C.转膜D.显色
7.蛋白质提取过程中常用的方法有（）
A.超声破碎B.匀浆法C.反复冻融法D.离心法
8.SDS中，上样缓冲液的成分包含（）
A.SDSB.甘油C.溴酚蓝D.DTT
9.化学发光法显色需要用到的试剂有（）
A.鲁米诺B.过氧化氢C.底物缓冲液D.显色剂
10.WB实验结果条带出现异常的原因可能有（）
A.抗体浓度过高B.封闭不充分C.转膜不完全D.电泳时间过长
答案：1.ACD2.ABCD3.ABCD4.AB5.ABC6.ABCD7.ABC8.ABCD9.ABC10.ABCD
判断题（每题2分，共10题）
1.SDS只能分离蛋白质，不能分离核酸。（）
2.转膜时，蛋白质从凝胶转移到膜上是依靠电场力。（）
3.封闭时间越长，非特异性结合的可能性越低。（）
4.一抗和二抗都必须是针对目标蛋白的抗体。（）
5.提高电泳电压可以加快蛋白质分离速度，且不会影响分离效果。（）
6.蛋白质样品在进行SDS前不需要定量。（）
7.PVDF膜在使用前需要进行甲醇活化。（）
8.显色后条带过淡一定是抗体浓度过低导致的。（）
9.实验中使用的抗体可以反复冻融。（）
10.不同来源的一抗和二抗可以随意搭配使用。（）
答案：1.√2.√3.×4.×5.×6.×7.√8.×9.×10.×
简答题（每题5分，共4题）
1.简述SDS的原理。
答案：SDS能使蛋白质变性并带上大量负电荷，消除蛋白质分子间原有电荷差异。在聚丙烯酰胺凝胶电场中，蛋白质分子依据分子大小不同进行分离，小分子迁移快，大分子迁移慢。
2.封闭液的作用及常用封闭液有哪些？
答案：作用是防止膜上未结合蛋白质的区域与抗体发生非特异性结合。常用封闭液有脱脂奶粉、牛血清白蛋白，它们能占据膜上空白位点，减少非特异吸附。
3.转膜过程中为什么要注意正负极？
答案：蛋白质带有负电荷，在电场中向正极移动。转膜时需保证凝胶靠近负极，膜靠近正极，这样蛋白质才能