(一)细胞运动功能——趋化功能检测1.原理：第31页，共42页，星期日，2025年，2月5日关于免疫细胞功能检测技术第1页，共42页，星期日，2025年，2月5日一淋巴细胞的功能检测淋巴细胞功能测定可分为体内实验和体外实验。体内实验主要是间接了解淋巴细胞对抗原、半抗原或有丝分裂原的应答反应；体外实验主要包括淋巴细胞对抗原或有丝分裂原刺激后的增殖反应、细胞毒性试验及淋巴细胞分泌产物的测定第2页，共42页，星期日，2025年，2月5日淋巴细胞T细胞（负责细胞免疫功能）B细胞（执行体液免疫功能）NK细胞（非特异性免疫作用）第3页，共42页，星期日，2025年，2月5日一、T细胞功能的检测T细胞增殖试验T细胞分泌功能测定T细胞介导的细胞毒试验体内试验第4页，共42页，星期日，2025年，2月5日（一）T淋巴细胞增殖试验1.原理：淋巴细胞DNA合成分化母细胞刺激物细胞变大细胞浆扩大空泡核仁明显核染色质疏松第5页，共42页，星期日，2025年，2月5日未转化和转化淋巴细胞的形态特征转化的淋巴细胞未转化的淋巴细胞淋巴母细胞过渡型细胞大小(直径μm)12～2012～166～8核大小、染色质增大、疏松增大、疏松不增大、密集核仁清晰、1～4个有或无无有丝分裂有或无无无胞质、着色增多、嗜碱增多、嗜碱极少、天青色浆内空泡有或无有或无无伪足有或无有或无无第6页，共42页，星期日，2025年，2月5日2.淋巴细胞转化的刺激物非特异性刺激物：PHA------T细胞ConA-------T细胞PWM-------T、B细胞LPS-------B细胞特异性刺激物：异种抗原同种组织抗原第7页，共42页，星期日，2025年，2月5日3.检测方法形态法：刺激物淋巴细胞（4-6天）母细胞化同位素法：PHA淋巴细胞（54h）DNA合成期+3HTdR掺入收集细胞?检测β射线测定细胞内的3H－TdR第8页，共42页，星期日，2025年，2月5日（1）形态学检查法第9页，共42页，星期日，2025年，2月5日方法学评价：优点：形态学方法简便易行，普通光学显微镜便能观察结果，适于基层实验室应用。缺点：是依靠肉眼观察形态学变化，判断结果易受主观因素影响，重复性和准确性较差。第10页，共42页，星期日，2025年，2月5日培养液3H-TdRPHA淋巴细胞全血分层液离心过滤测量放射性（2）3H-TdR掺入法第11页，共42页，星期日，2025年，2月5日优点：3H-TdR掺入法敏感性高，客观性强，重复性好。缺点：但需一定设备条件，同时还存在放射性核素污染问题。第12页，共42页，星期日，2025年，2月5日培养液3H-TdRPHA淋巴细胞全血分层液离心过滤测量放射性MTT测吸光度(3)MTT比色法第13页，共42页，星期日，2025年，2月5日(二)T细胞分泌功能测定体外培养的T细胞经各种丝裂原或抗原刺激后,分泌各种细胞因子,可借助免疫学、细胞生物学及分子生物学技术分别检测细胞因子含量、生物学活性或基因表达水平，以反映T细胞功能。第14页，共42页，星期日，2025年，2月5日（三）T细胞介导的细胞毒试验1.原理：靶细胞抗原T细胞观察杀伤活力致敏CTL靶细胞第15页，共42页，星期日，2025年，2月5日形态学方法：淋巴细胞+肿瘤细胞计数残留肿瘤细胞2.方法意义：肿瘤患者CTL杀伤肿瘤细胞的能力第16页，共42页，星期日，2025年，2月5日图15-2T细胞细胞毒试验示意图第17页，共42页，星期日，2025年，2月5日靶细胞51Cr洗涤去除游离的51Cr效应细胞测量上清液中释放的51Cr混合培养4-6小时51Cr释放法第18页，共42页，星期日，2025年，2月5日(四)体内试验特异性抗原皮肤试验PHA皮肤试验第19页，共42页，星期日，2025年，2月5日二、B细胞功能检测B细胞增殖