紫外-可见分光光度法
ultraviolet-visiblespectrophotometry,UV-Vis;基本要求：
1.理解紫外—可见吸收光谱的产生
2.掌握紫外—可见吸收光谱仪基本构成部件及其作用
3.了解紫外—可见吸收光谱的应用
;第四章紫外-可见分光光度法;电磁辐射基本性质——波粒二象性;电磁辐射的粒子性：
现象：光电效应、黑体辐射说明光的微粒性，具有不连续的能量微粒—光子。
描述：能量E=h?=hc/?(h=6.626?10-34Js)
E=h?将粒子性E与波动性?联系起来，能量与频率(波数)成正比，与波长成反比。
一个电子伏特（1eV），电子通过1V电压降所获得的能量：1eV=1.602?10–19J(焦耳);;电磁波谱分类
根据跃迁能级类型分为三个波谱区：
1.高能辐射区(X-射线、?射线)——内层电子能级跃迁；
2．光学光谱区(紫外、可见、红外)——原子或分子外层电子跃迁、分子振动或转动跃迁；紫外(200～400nm)，可见(400～750nm)
3．波谱区(微波、射频)——分子转动或者电子自旋、核自旋。
;第四章紫外-可见分光光度法;物质对光的吸收
当光通过透明物质时，其中某些波长的光会被选择性地吸收而使透射光强度减弱，则物质对光产生吸收作用。紫外-可见分光光度法、原子吸收分光光度法、红外吸收光谱法就是根据物质对光的吸收特性而建立的定性、定量分析方法。
;光的选择性吸收与物质颜色的关系：
1．可见光的颜色和互补色：
在可见光范围内，不同波长的光的颜色是不同的。平常所见的白光（日光、白炽灯光等）是一种复合光，它是由各种颜色的光按一定比例混合而得的。利用棱镜等分光器可将它分解成红、橙、黄、绿、青、蓝、紫等不同颜色的单色光。
2.白光除了可由所有波长的可见光复合得到外，还可由适当的两种颜色的光按一定比例复合得到。能复合成白光的两种颜色的光叫互补色光。;?/nm;;
分子吸收光谱的产生
分子吸收光谱是电子能级之间跃迁产生的。由于在分子中，除电子运动状态外，还有核的振动和转动，这三种运动能量都是量子化的，因此分子光谱较为复杂。
;;;三种能级都是量子化的，且各自具有相应的能量
ΔEe(1~20eV)
ΔEv(0.05~1eV)ΔEr(0.005~0.05eV);第四章紫外-可见分光光度法;;第四章紫外-可见分光光度法;第四章紫外-可见分光光度法;
不同浓度的同一种物质，其吸收曲线形状相似λmax不变。
而对于不同物质，它们的吸收曲线形状和λmax则不同。;朗伯—比尔定律(Lambert-Beer’slaw)
当一束平行单色光通过一个一定厚度的含有吸光物质的物体时，一些光子被吸收，光的强度会降低。
;吸收光谱特征及其表示方法;Lambert-Beer定律可表述为：
在一定条件下物质的吸光度与溶液浓度和液层厚度的乘积成正比。A=Kbc
朗伯—比尔定律成立的前提是：（1）入射光是单色光；（2）吸收发生在均匀的介质中；（3）吸收过程中，吸收物质互相不发生作用（4）稀溶液(通常c0.01mol/L)。
摩尔吸光系数?(molarabsorptivity)：其意义是溶液中吸光物质浓度为1mol/L，吸收层厚度为1cm时的吸光度。此时，Lambert-Beer定律可表述为A=?bc
;1）吸收物质在一定波长和溶剂条件下的特征常数，可作为定性鉴定的参数；
2）不随浓度c和光程长度b的改变而改变。在温度和波长等条件一定时，ε仅与吸收物质本身的性质有关，与待测物浓度无关；
3）同一吸收物质在不同波长下的ε值是不同的。在最大吸收波长λmax处的摩尔吸光系数，常以εmax表示。εmax表明了该吸收物质最大限度的吸光能力，也反映了光度法测定该物质可能达到的最大灵敏度。;摩尔吸光系数;实际溶液对吸收定律的偏离及原因：;
入射光为非单色光：
严格地说吸收定律只适用于入射光为单色光的情况。但在紫外可见光分光光度法中，入射光是由连续光源经分光器分光后得到的，这样得到的入射光并不是真正的单色光，而是一个有限波长宽度的复合光，这就可能造成对吸收定律的偏离。;非平行光和光的散射：
当入射光是非平行光时，所有光通过介质的光的光程不同，引起小的偏离。另外，当溶液中含有悬浮物或胶粒等散射质点时，入射光通过溶液时就会有一部分光因散射而损失掉，使透过光强度减小，测得的吸光度增大，从而引起偏离吸收定律。;
化学因素引起的偏离：
朗伯-比耳定律的假定：所有的吸光质点之间不发