色谱分析法概论;色谱法绪论;色谱法绪论;色谱法绪论;色谱法绪论;;色谱法绪论;色谱法绪论;色谱法绪论;色谱法绪论;色谱法绪论;色谱法绪论;色谱法绪论;色谱法绪论;色谱法绪论;色谱法绪论;色谱法绪论;色谱法绪论;色谱法绪论;色谱法绪论;色谱法绪论;色谱法绪论;色谱法绪论;色谱法绪论;色谱法绪论;色谱法绪论;色谱法绪论;色谱法绪论;吸附柱色谱法的基本原理:
吸附剂通常是多孔径的固体颗粒物质,在它的表面存在分散的吸附中心。吸附色谱的实质就是根据组分在吸附剂上吸附能力的不同来进行分离。;吸附柱色谱法的基本原理:
当试样中组分分子(X)被流动相带入柱内后,在吸附剂表面将发生组分分子(X)与吸附在固定相上的流动相分子(S)的竞争吸附,直到组分分子被吸附到固定相上的速度与其从固定相上解吸下来的速度相等时,达到吸附平衡。;;吸附等温线(adsorptionisotherm)
在一定温度下,组分在吸附剂表面被吸附达到平衡时,组分在两相中浓度相对关系的曲线,称为吸附等温线。它用于描述组分在吸附剂上的吸附规律。
吸附等温线的横坐标为流动相中组分的浓度,纵坐标为被吸附在固定相上的组分的浓度。
吸附等温线通常有直线型,凸线形、凹线形三种。;三类等温线与相应的色谱峰;吸附等温线(adsorptionisotherm)
凸形等温线:吸附色谱容易出现凸形等温线,形成拖尾峰。;凸形等温线形成原因:
吸附剂表面常有多种吸附力不同的吸附点位,溶质分子总是先占据吸附力强的点位,然后再占据吸附力弱的点位。
这样,溶质在浓度低时被吸附剂吸附得较牢固,浓度高时吸附力相对减弱。
因此,组分高浓度部分的色谱谱带中心部分移动较快,赶上了色谱谱带的前沿部分,而色谱谱带的后沿部分由于吸附较牢固而延迟流出,这样就形成前缘陡峭,后部拖尾的不对称色谱峰。组分浓度较高时,出现凸形等温线较多。;吸附等温线(adsorptionisotherm)
凹形等温线:吸附色谱出现凹形等温线的情况较少,形成前缘平缓,后缘陡峭的不对称色谱峰。;凹形等温线形成原因:
有时因组分浓度较高时,有时在吸附过程中与固定相之间发生相互作用,影响了吸附剂表面的性能,或组分之间的相互作用,使得谱带中心的组分高浓度区域吸附较强,从而移动较慢,这样就形成前缘平缓,后缘陡峭的不对称色谱峰。;吸附等温线(adsorptionisotherm)
直线形等温线:吸附色谱出现直线形等温线的情况也较少。这是理想的吸附等温线。得到对称的色谱峰形。;直线形等温线形成原因:
;吸附等温线(adsorptionisotherm)
吸附等温线仅在较低的浓度范围内呈线性。所谓吸附剂的线性容量就是指吸附等温线保持线性、能得到正常色谱峰形时,色谱柱对样品的最大负载量(以每克吸附剂能吸附的样品量表示)。
其实,在凸形等温线的起始部分,即低浓度时,也近似为直线。所以,为了得到较好的色谱峰形,应选择较小的进样量。; 固定相(吸附剂)
吸附柱色谱所用固定相为吸附剂。
对吸附剂的基本要求是:
①吸附剂为粒度均匀,有一定机械强度的细颗粒;
②具有较大的表面积,吸附剂表面的活性程度均匀,即吸附点位的吸附能力大小均匀,吸附剂的线性容量大;
③不与流动相和被测组分发生化学反应;也不溶于流动相。;常用的吸附剂可分为极性和非极性两大类。
极性吸附剂包括各种无机氧化物,如硅胶,氧化铝、氧化镁、硅酸镁及分子筛等;
非极性吸附剂最常见的是活性炭。
其中最常用的吸附剂是氧化铝和硅胶。;;;硅胶(SiO2·xH2O)
当加热至100oC左右又能可逆地除去水,这些表面吸附的水称为“自由水”,加热去水过程称为活化。可见硅胶的活性与含水量有关。;硅胶的活化:
一般为110oC加热30min。加热到200oC,表面吸附水全部脱附,只剩下表面硅羟基,活性最高;加热至700oC,大部分硅羟基不可逆地变成硅氧烷,对极性分子丧失吸附选择性,不再适用于吸附色谱。;氧化铝:
一种分离能力强、活性可以控制,应用较广的强极性吸附剂。供柱色谱使用的氧化铝有酸性、中性和碱性三种。
酸性氧化铝适用于分离酸性物质,例如羧酸和氨基酸。
中性氧化铝适用于烃、生物碱、萜类、甾族、甙类、酯、内酯、醛、酮、醌类化合物,尤其是多环芳烃的分离,凡是酸性、碱性氧化铝上可以分离的化合物,中性氧化铝都能分离。
碱性氧化铝适用于胺类或其它碱性化合物的分离。;与硅胶一样,氧化铝也能强烈地吸水,水不易被其它化合物置换,因而使其活性降低。通常也采用加热方法使其活化。
氧化铝以及硅胶的活性与含水量关系:活性的强弱用活度级数表示,其活性越高,活度级数值越小,吸附剂的含水量越低。
吸附剂选择的基本原则是:分离弱极性物质一般选用强极性吸附剂,分离强极性物物质,应选用活性弱一些的吸附剂。;;流动相(洗脱剂)
在吸附柱色谱