Page?*关于乳酸菌的筛选及应用第1页，共23页，星期日，2025年，2月5日乳酸菌的分类乳酸菌的筛选乳酸菌的应用第2页，共23页，星期日，2025年，2月5日第一部分、乳酸菌的分类运动性：通常不运动，有的能够运动,具有周生鞭毛。营养类型：化能异氧型需氧情况：微好氧性1、乳杆菌属（Lactobacillus）形态：细胞呈长或细长杆状、弯曲形短杆状,一般成链状排列第3页，共23页，星期日，2025年，2月5日形态：细胞呈球形或卵圆形，成对或成链排列运动性：一般不远动营养类型：化能异养型需氧情况：兼性厌氧型2、链球菌属（Streptococcus）第4页，共23页，星期日，2025年，2月5日形态：细胞球形或豆状，成对或成链排列运行性：不运动营养类型：化能异养型需氧情况：兼性厌氧型3、明串珠菌属（Leuconostoc）第5页，共23页，星期日，2025年，2月5日形态：细胞呈多样形态：Y字形、V字形、弯曲状、勺形，典形形态为分叉杆菌运行性：不运动营养类型：化能异养型需氧情况：专性厌氧4、双歧杆菌属（Bifidobacterium）第6页，共23页，星期日，2025年，2月5日形态：细胞球形，成对或四联状排列运行性：不运动营养类型：化能异养型需氧情况：兼性厌氧5、片球菌属（Pediococcus）第7页，共23页，星期日，2025年，2月5日第二部分、乳酸菌的筛选乳酸菌绝大多数都是厌氧菌或兼性厌氧的化能营养菌。生长繁殖于厌氧或微好氧、矿物质和有机营养物丰富的环境中。具体如下：（1）与动物相关分布：乳汁、消化道、粪便等；（2）与植物相关分布：花蜜、树液、植物残骸、果实损伤部位等；（3）发酵食品：泡菜、酱油、发酵肉制品等；（4）乳酸饮料：酸奶等。一、乳酸菌的分布第8页，共23页，星期日，2025年，2月5日（一）溶钙圈法利用一些产酸类细菌在含CaCO3的培养基上产生CaCO3溶解圈，从而筛选出这些产酸类细菌，可用于乳酸菌的筛选。其中培养基中加入CaCO3的作用是：①鉴别能产生酸的细菌；②中和产生的酸，以维持培养基的PH。二、筛选方法第9页，共23页，星期日，2025年，2月5日1、乳酸菌筛选培养基（MRS培养基）配方（1L）:蛋白胨10.0g，牛肉膏10.0g，酵母提取物5.0g，K2HPO42.0g，柠檬酸三铵2.0g，乙酸钠5.0g，葡萄糖20.0g，吐温801.0mL，MgSO4·7H2O0.5g，MnSO4·4H2O0.25g配制：1.调PH至6.2～6.4；2.称取20gCaCO3加入到100mL蒸馏水中，制成CaCO3乳浊液；3.将MRS培养基和CaCO3乳浊液分开灭菌；4.倒平板前，待培养基融化冷却后，平板上加入一定量的CaCO3乳浊液，晾干了以后再接种。第10页，共23页，星期日，2025年，2月5日样品预处理→梯度稀释至10-6→选择合适的稀释度涂布→37℃培养48h→挑选产生溶钙圈的菌落反复在MRS培养基上划线→挑起单菌落染色，经镜检确认为纯种→挑选革兰氏阳性单菌落→试管穿刺4℃冰箱保存。2、筛选过程第11页，共23页，星期日，2025年，2月5日（二）溴甲酚绿指示剂法1、培养基：MRS培养基（含溴甲酚绿酒精溶液）2、筛选过程：同上，不同之处是稀释涂布后长出菌落，挑取使溴甲酚绿变色的菌落。第12页，共23页，星期日，2025年，2月5日（三）几种乳酸菌筛选举例样品来源：市售酸奶培养基：M17改良培养基培养温度：42℃需氧情况：兼性厌氧筛选方法：常规的稀释涂布和划线分离1、嗜热链球菌第13页，共23页，星期日，2025年，2月5日2、保加利亚乳杆菌样品来源：市售酸奶培养基：牛肉浸膏1.5％，酵母浸膏0.5％，葡萄糖3.0％，柠檬酸三铵0.2％，七水硫酸镁0.02％，琼脂1.5％，pH5.1。培养温度：42℃需氧情况：兼性厌氧筛选方法：常规的稀释涂布和划线分离法第14页，共23页，星期日，2025年，2月5日样品来源：婴儿新鲜粪便培养基：MRS培养基、NPNL培养基、TYP培养基、