（2）定量方法标准曲线法：配制一系列标准浓度试样测定荧光强度，绘制标准曲线，再在相同条件下测量未知试样的荧光强度，在标准曲线上求出未知试样的浓度；比较法：在线性范围内，测定标样和试样的荧光强度，比较；第30页，共56页，星期日，2025年，2月5日3.荧光分析法的应用目前荧光分析大多用于定量分析，由于自身发射荧光的化合物不多，因此往往利用有机试剂与荧光较弱或不显荧光的物质结合形成发荧光的配合物来进行测定。(1)无机化合物的分析与有机试剂形成配合物后测量；可测量约60多种元素。（2）有机化合物的分析芳香族化合物具有共轭的不饱和结构，多能发生荧光，可以直接进行荧光测定；而脂肪族化合物的分子结构较简单，本身能发荧光的很少，须与某些试剂反应后才能进行分析。第31页，共56页，星期日，2025年，2月5日第32页，共56页，星期日，2025年，2月5日第33页，共56页，星期日，2025年，2月5日三、磷光分析法及应用与荧光相比，磷光具有两个特点（1）磷光辐射的波长比荧光长（2）磷光的寿命比荧光长1.磷光强度与磷光物质浓度的关系当磷光物质浓度很小时，磷光强度Ip与磷光物质浓度c之间的关系式为Ip=2.3φpI0εbc式中：φp为磷光效率，I0为激发光的强度，ε磷光物质的摩尔吸收系数，b为试样池的光程。在一定条件下，φp、I0、ε、b均为常数，所以上式可写成：Ip=Kc即磷光强度与磷光物质的浓度c成正比。第34页，共56页，星期日，2025年，2月5日2.温度对磷光强度的影响随着温度的降低，磷光逐渐增强3.重原子效应使用含有重原子的溶剂或在磷光物质中引入重原子取代基，都可以提高磷光物质的磷光强度，这种效应称作重原子效应。4.低温磷光用液氮作冷却剂（77K）第35页，共56页，星期日，2025年，2月5日5.室温磷光由于低温磷光需要低温实验装置、溶剂选择的限制，发展了以下几种室温磷光法：（1）固体表面室温磷光法此法基于测量室温下吸附于固体基质（载体）上的有机化合物所发射的磷光。理想的载体是既能将分析物质牢固地束缚在表面或基质中以增加刚性，并减小三重态的碰撞猝灭等非辐射去活化过程，而本身又不产生磷光背景。第36页，共56页，星期日，2025年，2月5日（2）胶束增稳的溶液室温磷光法当向溶液中加入适量的表面活性剂，形成胶束，由于胶束的多相性，改变了磷光团的微环境和定向的约束力，从而强烈影响了磷光团的物理性质，减小了内转化和碰撞能量损失等非辐射去活化过程的趋势，明显增加了三重态的稳定性，从而可以实现在溶液中测量室温磷光。第37页，共56页，星期日，2025年，2月5日6.磷光分析仪和荧光分析仪器基本相似。在荧光分光光度计上配上磷光附件后，即可用于磷光测定。（1）试样室将试样放在盛液氮的石英杜瓦瓶内，即可用于低温磷光测定。（2）磷光镜有些物质同时会发生荧光和磷光，为了能在同时有荧光现象的体系中测定磷光，通常必须在激发光单色器和液槽之间以及在液槽和发射光单色器之间各装一个斩波片，并由一个同步马达带动，这种装置称作磷光镜。第38页，共56页，星期日，2025年，2月5日第39页，共56页，星期日，2025年，2月5日7、磷光分析法的应用磷光分析法在无机化合物的测定中应用较少，它主要用于测定有机化合物。(1).稠环芳烃分析采取固体表面室温磷光分析法快速灵敏测定稠环芳烃和杂环化合物（致癌物质）；见表(2).农药、生物碱、植物生长激素的分析(3).药物分析见表第40页，共56页，星期日，2025年，2月5日关于分子发光分析第1页，共56页，星期日，2025年，2月5日分子发光包括荧光，磷光，化学发光，生物发光。室温下，大多数分子处于基态的最低振动能级，处于基态的分子吸收能量（光能、化学能、电能或热能）后被激发为激发态，激发态不稳定，将很快衰变到基态，若返回到基态时伴随着光子的辐射，这种现象称为“发光”。第2页，共56页，星期日，2025年，2月5日一、荧光与磷光的产生过程
luminescenceprocessofmolecularfluorescencephosphorescence由分子结构理论，主要讨论荧光及磷光的产生机理。1.分子能级与跃迁分子能级比原子能级复杂；在每个电子能