（4）最好再确保连接好保护柱（多使用相应柱制造商针对性提供
的保护柱），再用选用的洗脱液以0.6ml/min流速平衡1h以上，进样检测。同样，若洗脱液中含有缓冲盐类，在用分析洗脱液平衡之前，先用不含缓冲盐的同比例洗脱液过渡，冲洗约10倍柱体积，避免缓冲盐在分析柱内析出。
（5）特别提示：
①洗脱液要求是新制的低电导率缓冲液，或者是有UV吸收的缓冲液。对于阳离子交换柱，多用柠檬酸或酒石酸缓冲液（或其混合溶液）、邻苯二甲酸缓冲液，pH范围从2.5到6.5；对于阴离子交换柱，多用磷酸缓冲液、硝酸铵溶液（1mMol/L），邻苯二甲酸缓冲液，pH范围从2.5到6.5。绝对禁止使用水杨酸缓冲液，因水杨酸分解产物会改变固定相的性质。洗脱液在使用以前必须用0.45微米滤膜过滤并彻底脱气，以防止发生检测和泵送问题。
②提倡在室温环境使用，为了提高分析的稳定性，可以设置高于室温5～10℃的柱温，最好不要在40℃以上使用。第24页，共58页，星期日，2025年，2月5日*③使用过程中不要超过其耐受最高压力（不锈钢柱：4500psi；玻璃柱：3000psi）。④增加流速或者降低流速要采取小的间隔变化以防止柱床的扰动。更换柱子，必须先降低流量至0，等待洗脱液完全流出柱子，压力变化到0（约2分钟）后再更换。⑤必须防止将来自流动相或者样品中的疏水性或与流动相极性差别很大的化合物进入色谱柱，特别地，要绝对禁止导入颗粒杂质，以防止操作压力增高，污染物难以或者不能去除。（6）分析完毕，净化程序基本同C18柱，先用去离子水以0.6ml/min流速冲洗约20倍柱体积→然后用甲醇以0.6ml/min流速冲洗约10倍柱体积，纯甲醇饱和后→密封保存即可。（注意：一定要确保在柱子内没有缓冲液或者其他含盐类的洗脱液的情况下保存色谱柱。）（7）长时间保存后重新使用，重复上述（1）～（6）即可。第25页，共58页，星期日，2025年，2月5日*（8）使用并正确处理完毕，入库保存于防尘环境下，登记备案。（9）特别说明：部分离子交换柱的使用条件、保存溶剂与保存条件、预平衡溶剂与方法、再生方法等有特殊要求。[eg.phenomenexRezexROA-OrganicAcidH+(酸性阳离子柱)]①柱压必须控制在600psi之内；流动相中有机相比例不得超过10%，流速应小间隔上升至0.6ml/min，且不得超过0.6ml/min，降低流速亦然；柱子用超纯水饱和后保存于4℃左右冰箱中；运行时，柱温不超过85℃。②分析完毕，用超纯水清洗30倍柱体积以上，密封保存。③为防止色谱柱长时间保存时长菌，应使用0.05mol/L左右的硫酸溶液（阳离子交换柱）或氨水溶液（阴离子交换柱）饱和后保存于4℃左右冰箱中。新柱或旧柱再次使用前均需先用去离子水，以0.6mL/min流速冲洗色谱柱约30倍柱体积，将柱内硫酸或氨水彻底洗出→然后用流动相平衡，进样检测即可。分析完毕，先用去离子水，以0.6ml/min流速冲洗色谱柱约30倍柱体积→再用0.5mol/L左右的0.05mol/L左右的硫酸溶液（阳离子交换柱）或氨水溶液（阴离子交换柱）冲洗色谱柱约10倍柱体积→密封，保存即可。具体流速需根据柱长与柱内径选择，一般不允许超过0.6ml/min，因流速过大易导致键合相随流动相流出。其他具体要求，请仔细阅读相关说明书，并以说明书为准。第26页，共58页，星期日，2025年，2月5日2.4手性色谱柱（ChiralHPLCColumn）手性色谱柱（ChiralHPLCColumn）是由具有光学活性的单体，键合在硅胶或其它聚合物上制成手性固定相（ChiralStationaryPhase）。通过引入手性环境使对映异构体间呈现物理特征的差异，从而达到光学异构体分离的目的。主要有刷（Brush）型或称为Prikle型、纤维素（Cellulose）型、环糊精（Cyclodextrin）型、大环抗生素（Macrocyclicantibiotics）型、蛋白质（Protein）型、配位交换（Ligandexchange）型、冠醚（Crownethers）型等类型，此类色谱柱可用于正相系统与反相系统，多用于正相系统。常用的是蛋白质（Protein）型，其分离依赖于疏水相互作用和极性相互作用，大多可用于反相色谱条件。目前使用较多的是α-酸性糖蛋白（α-AcidGlycoprotein，AGP）、人血清白蛋白（HumanSerumAlbumin，HSA）、牛血清白蛋白（BovineSerumAlbumin，BSA）和卵类粘蛋白（Ovomucoid，OV）。第27页，共58页，星期日，2025年，2月5日