第1页，共27页，星期日，2025年，2月5日一、基础知识(一)微生物:1.特点：结构都相当简单,个体多数十分微小.通常要用光学显微镜或电子显微镜才能看到，有的甚至没有细胞结构.且体内一般不含有叶绿素.不能进行光合作用.2.微生物包括五类病毒细菌放线菌真菌原生动物第2页，共27页，星期日，2025年，2月5日(二)培养基1.分类(按物理形态分)(1)液体培养基(2)固体培养基常用的固体培养基:琼脂固体培养基.②微生物在固体培养基表面生长,可以形成肉眼可见的菌落.第3页，共27页，星期日，2025年，2月5日2.培养基内所含的基本物质(1)水(2)碳源(3)氮源(4)无机盐第4页，共27页，星期日，2025年，2月5日(1)pH值如:培养霉菌需酸性、培养细菌需中性或微碱性(2)特殊营养物质----?如：培养乳酸杆菌需要在培养基中添加维生素(3)氧气的含量如:培养厌氧微生物时需要提供无氧的条件3.培养基内所需的其他条件练习生长因子第5页，共27页，星期日，2025年，2月5日(三)无菌技术1、获得纯净培养物的关键:2、无菌技术包括的四大方面(参看教材15页)3、消毒与灭菌(1)消毒：概念：使用较为温和的物理或化学方法仅杀死物体表面或内部一部分对人体有害的微生物。包括芽孢和孢子吗？方法:煮沸消毒法巴氏消毒法:如牛奶的消毒化学药剂消毒:酒精、氯气、石碳酸、煤酚皂溶液等紫外线消毒(不包括芽孢和孢子)防止外来杂菌的入侵第6页，共27页，星期日，2025年，2月5日（2）灭菌概念：使用强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子。方法：a灼烧灭菌b干热灭菌c高压蒸汽灭菌灼烧灭菌微生物的接种工具(接种环、接种针)或其他金属用具直接在火焰的充分燃烧层灼烧注意适用范围第7页，共27页，星期日，2025年，2月5日干热灭菌160－170℃；1－2h能耐高温的需要保持干燥的物品(玻璃器皿)高压蒸汽灭菌100kPa121℃15-30min通常用于培养基的灭菌第8页，共27页，星期日，2025年，2月5日二、实验操作（一）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基计算－称量－溶化－灭菌－倒平板（二）纯化大肠杆菌接种方法有：平板划线法和稀释涂布平板法（三）将接种后的培养基和一个未接种的培养基放入37℃恒温箱中培养12h和24h后，观察并记录第9页，共27页，星期日，2025年，2月5日三、课题延伸：菌种的保藏1、斜面保藏（临时保存）2、甘油保藏（长期保存）练习第10页，共27页，星期日，2025年，2月5日再见第11页，共27页，星期日，2025年，2月5日倒平板第12页，共27页，星期日，2025年，2月5日讨论:(1).培养基灭菌后，需要冷却到50℃左右时，才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温度？(2).为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？(3).平板冷凝后，为什么要将平板倒置？(4).在倒平板的过程中，如果不小心将不锈钢焊管培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？提示：可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时，就可以进行倒平板了。答：通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。答：平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后的培养基表面的湿度也比较高，将平板倒置，既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。答：空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生，因此最好不要用这个平板培养微生物。第13页，共27页，星期日，2025年，2月5日1、平板划线法第14页，共27页，星期日，2025年，2月5日(1).为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？为什么？(2).在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？(3).在作第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从上一次划线的末端开始划线？讨论:答：操作的第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物；每次划线前灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后，接种环上残留的菌种，使下一次划线时，接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端，从而通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，以便得到菌落。划线结束后灼烧接种环，能及时杀死接种环上残留的菌