关于临床真菌学检验基本技术第1页，共24页，星期日，2025年，2月5日临床真菌基础总论一、真菌的基本介绍二、真菌分类及存在形式三、真菌的一般检查★一般镜检★常规染色★培养及鉴定方式四、真菌的致病性五、真菌的防治原则第2页，共24页，星期日，2025年，2月5日●真菌(fungus)属真核细胞型微生物，有真正的核，单细胞或多细胞异养微生物，不含叶绿素，大都能形成硬的多糖细胞壁，细胞壁结构较细菌简单，细胞壁含几丁质和纤维素。●估计有100-150万种，分布广泛，从30000米高空—地表—海洋都有真菌的生长。●大多数真菌对人类是有益的，只有少数对人类有害。一、真菌的基本介绍第3页，共24页，星期日，2025年，2月5日二、真菌分类及存在形式A、真菌分类从米奇里（P.A.Micheli，1729）开始，至今已有近280年的历史，这期间经过世界上无数真菌科学工作者的努力，使真菌分类的工作有了极大地发展。B、但是由于真菌分类存在着无数困难，现有的真菌分类系统还有待进一步发展与完善（尚未有一个大家供认的系统）。（1）、真菌的分类第4页，共24页，星期日，2025年，2月5日1、Ainsworth（1973）分类系统特点：成立菌物界，分2门，真菌门下分成5个亚门；取消藻状菌纲，依据鞭毛的有无划分成鞭毛菌亚门、接合菌亚门。2、AlexopoulosMims（1979）分类系统特点：成立菌物界，菌物界Myceteae、Fungi分3个门；真菌类依鞭毛的有无分2门。3、菌物分别归属藻界、真菌界、和原生生物界的分类系统特点：将藻界、真菌界、和原生生物界分开成三个独立的界属二、真菌分类及存在形式第5页，共24页，星期日，2025年，2月5日与医学有关的真菌有四个亚门接合亚门：毛霉、根霉等子囊霉亚门：酵母菌属、小孢子霉属等担子霉亚门：新生隐球菌、灵芝、食用菌等半知霉亚门：假丝酵母菌属、球孢子菌属等最新的真菌分类接合菌门子囊菌门担子菌门壶菌门第6页，共24页，星期日，2025年，2月5日根据菌落形态分类：酵母菌酵母样菌霉菌双相真菌第7页，共24页，星期日，2025年，2月5日二、真菌分类及存在形式（2）、真菌的存在形式菌丝和孢子A、真菌的菌丝先端为生长点，通过顶端延长而生长。菌丝生长生出分枝，使其与营养基质接触面积增大，提高吸收力。菌丝内原生质从衰老部分流向幼嫩部分，使菌丝不断伸长，这就是生长。B、在一定条件下由生长转入发育阶段即产生繁殖体，生长与发育受环境控制，多数真菌在贫养和低温条件下转入有性阶段，少数菌在高温下转入有性阶段。还有些真菌在其不同的发育阶段，必须在不同的寄主植物上渡过，即转主寄主（现象）。C、只要是专门生殖的细胞，正常情况下不需要两两结合就可以单个细胞发育成一个个体，这就是孢子。第8页，共24页，星期日，2025年，2月5日菌丝的形态：螺旋状、球拍状、结节状、鹿角状、梳状等，菌丝形态有助于鉴别真菌。孢子的形态：有性孢子：同一个菌体或不同菌体上两个细胞融合成经减数分裂形成。无性孢子：细胞分化或出芽形成。形态有分生孢子、叶状孢子和孢子囊孢子。第9页，共24页，星期日，2025年，2月5日菌丝和孢子第10页，共24页，星期日，2025年，2月5日第11页，共24页，星期日，2025年，2月5日三、真菌的一般检查（1）、一般镜检A、氢氧化钾法将标本置于在玻片上，加一滴10%KOH浮载液，盖上盖玻片放置5~10分钟后或直接在火焰上快速通过2~3次微加热，轻压盖玻片驱逐气泡并将标本压薄后置于显微镜下检查。先在低倍镜下观察有无菌丝和孢子，然后用高倍镜观察孢子和菌丝的形态特征、大小和排列等。对于角质标本，必要时可在10%KOH溶液中，加入终浓度为40%二甲亚砜，促进其溶解。此法适用于皮屑、甲屑、毛发、痂皮、痰、组织、耵聍、粪便等标本的直接涂片检查。第12页，共24页，星期日，2025年，2月5日B、胶带粘贴法三、真菌的一般检查（1）、一般镜检用透明胶带直接贴于取材部位，数分钟后揭下，充分展平后，直接置贴于加有一滴浮液的载玻片上此液可以是10%~20%的KOH，也可以采用乳酸酚棉蓝染液（易于观察）。该法常用于花斑癣患处的直接检查。第13页，共24页，星期日，2025年，2月5日三、真菌的一般检查（2）、常规染色乳酸酚棉蓝染色传统染色法，酵母菌细胞、菌丝体和产孢结构等皆可被染成亮蓝色；背景为暗淡的蓝