考马斯亮蓝染色比色法
实验器材：
T6型紫外分光光度计
检测仓控制面板单色光入射口
比色皿
实验流程
1.取出洁净的试管，标记，按要求加入蒸馏水和标准蛋白质试
样溶液。
2.向管内加入考马斯亮蓝色染色液。
3.立即使用移液器上下吹打混匀，也可以盖上盖子上下颠倒混
匀。完毕后室温放置5min。
4.打开分光光度计电源，将试样溶液移至干净洁净的比色皿中（溶液大概高度
为2/3处），擦净比色皿光面放入检测仓内。参比管（未加入蛋白质）放在
最靠近检测人的位置。将其他试样管放入检测仓内。
5.关闭检测仓门，设置实验参数。（光度测量→检测波长→输入595nm→Enter
确认→Zero调零→开始检测Start）。
6.记录数据，取出比色皿并清洗。
结果处理与注意事项
计算方法：
采用标准曲线法，通过标准曲线的拟合，计算出待测样本的蛋白质浓度。主要
实验数据是标准溶液和待测样本的吸光度。
首先，试样溶液的紫外吸收光度值要进行空白扣减，需注意，使用T6型紫外分
光光度计，测定值即为扣减后的数值。
实验处理：
1.绘制蛋白质含量的标准曲线，以标准蛋
白质试样溶液浓度为横坐标，各种试样
溶液的紫外吸收值为纵坐标，绘制散点
图。
2.选择线性拟合方式，拟合得出线性方程，
同时自动计算出线性回归系数R2值。
2
R值越接近1，代表拟合程度越好。
3.将待测溶液的吸光光度值代入线性拟合
方程中，计算得到X值，即为待测蛋
白质试样溶液的浓度。
典型错误操作
1.比色皿选择错误：本实验不能使用石英比色皿进行含量测定。可采用一次性
的塑料比色皿或玻璃比色皿进行检测。
2.比色皿光面毛面放反。
3.比色皿没有擦干或者使用纸巾擦拭。
4.加入比色皿的液体过少：液面高度在比色皿的2/3处为宜，加入过少导致检
测溶液不能完全覆盖入射光照射面。
5.溶液未混匀。
6.溶液放置时间：放置时间过长导致产物生成过多，超出仪器检测范围。放置
时间过短，导致反应产物过少，反应不完全。
观看心得
最开始的凯氏定氮法由于检测手段的缺陷，导致不少的商家利用缺陷进行
蛋白质含氮量的掺假。这些造假手段不仅仅是对科学精神的亵渎，更是对同行
和公众的欺骗，严重危害了人们的健康安全。凯氏定氮法因其检测原理和技术
限制，在面对精心设计的掺假行为时显得力不从心。该方法是通过对样品中氮
含量的测定，进而推算出蛋白质的大致含量，这本是一项科学严谨的技术。然
而，正是由于这种方法只能间接反映蛋白质的存在，并且对于不同来源的氮化
合物缺乏区分度，给了不法分子可乘之机。他们通过添加廉价且高氮的非蛋白
物质，如三聚氰胺，来人为提高检测结果中的氮含量，从而误导消费者和监管
者，让劣质甚至是有害的产品披上了“高品质”的外衣。
这种行为不仅仅是对科学精神的践踏，更是对人类道德底线的挑衅。它直
接损害了消费者的健康权益，引发了严重的食品安全危机。以震惊全国的三鹿
奶粉事件为例，无数无辜的儿童因此而遭受肾结石等健康问题，家庭承受无尽
的痛苦和社会信任遭到前所未有的冲击。这起事件深刻揭示了一个事实：当商
业利益凌驾于伦理责任之上时，其后果将是灾难性的。
面对这样的现实，社会各界纷纷觉醒，政府加大了法律法规的制定和完善
力度，提高了食品检测标准和技术门槛，力求从源头堵住漏洞，严惩违法行为。
科研人员也在不懈努力，开发更为精准高效的检测技术。与此同时，企业界也
逐渐认识到，诚信经营才是长久之道。越来越多的企业开始注重产品品质和品
牌信誉，建立健全内部质量控制体系，积极参与行业自律组织，致力于打造一
个透明、公平、健康的市场环境。消费者权益保护意识的提升，也让市场需求
倒逼企业必须正视产品质量问题，任何试图蒙混过关的行为都将受到市场的严
厉惩罚。
综上所述，虽然凯氏定氮法的局限曾被不良商家利用，造成了一系列令人
痛心疾首的食品安全事故，但它同时也催生了一场自上而下的变革。这场变革
促使科学技术不断进步，法律制度日益完善，企业社会责任感显著增强，最终
目标都是为了守护每一个普通人的餐桌安全，维护整个社会的健康稳定发展。
在这个过程中