二轮复习;双脱氧链终止法;双脱氧法测序原理;双脱氧法测序;双脱氧法测序;双脱氧法测序;双脱氧法测序;注意1、ddNTP的3’端没有-OH，所以其后面无法与另一个dNTP或ddNTP形成磷酸二酯键。
注意2、ddNTP与dNTP在反应体系中是相互竞争的。;双脱氧法测序;双脱氧法测序过程;2、测序模板链结合引物后，加入试管中，并向试管中加入足量的DNA聚合酶、4种dNTP和1种特定的ddNTP。;双脱氧法测序过程;双脱氧法测序过程;双脱氧法测序过程;双脱氧法测序过程;模板;自动化DNA测序;1、双脱氧末端终止法测定DNA序列是指将3’碳脱氧的双脱核苷酸（ddATP/ddTTP/ddGTP/ddCTP）混入正常的PCR体系进行扩增，并通过电泳结果读出DNA序列。例如，在通过单侧引物对单链DNA进行延伸时，将ddATP混入正常的4种脱氧核苷酸（dATP/dTTP/dGTP/dCTP）中作为原料。则每次遇到模版碱基为T时，子链上添加的单体可能是ddATP，也可能是dATP。若连接的是dATP，则延伸可继续进行；若连接的是ddATP，则此时3’末端无氧原子，不能连接下一个单体，延伸终止。反应结束后，将产物加入A泳道内电泳。C、G、T泳道内情况依次类推，最终电泳结果如下图所示。;（1）T泳道内有3个不同长度的条带，说明合成子链时，T碱基被添加了____次；在电泳图中，最小的产物位于______泳道，说明延伸时第一个添加的碱基是________；
（2）合成的全长的子链序列是5’-_____________________________-3’，被测序的单链的序列是5’-_____________________________-3’。;2、双脱氧核苷三磷酸（ddNTP）与脱氧核苷三磷酸（dNTP）的结构如图所示。已知ddNTP按碱基互补配对的方式加到正在复制的子链中后，子链的延伸立即终止。某同学要通过PCR技术获得被32P标记且以碱基C为末端的、不同长度的子链DNA片段。在反应管中已经有单链模板、引物、DNA聚合酶和相应的缓冲液等，还需要加入下列哪些原料();3、Sanger法(双脱氧链终止法)是核酸序列测定的一种方法。实验所用的反应体系包括待测序的单链DNA模板、引物、四种脱氧核苷酸(其中一种用放射性同位素标记)和DNA聚合酶。整个实验分为四组，每组按一定比例加入一种底物类似物(ddATP、ddGTP、ddCTP、ddTTP)，它能随机掺入合成的DNA链，一旦掺入后DNA合成立即终止，获取DNA片段的电泳(其分离原理仅依据分子量大小)结果如图所示。下列分析错误的是();4、(不定项)(2024·湖南，15)最早的双脱氧测序法是在PCR反应体系中，分别再加入一种少量的双脱氧核苷三磷酸(ddATP、ddCTP、ddGTP或ddTTP)，子链延伸时，双脱氧核苷三磷酸也遵循碱基互补配对原则，以加入ddATP的体系为例：若配对的为ddATP，延伸终止；若配对的为脱氧腺苷三磷酸(dATP)，继续延伸；PCR产物变性后电泳检测。通过该方法测序某疾病患者及对照个体的一段序列，结果如图所示。下列叙述正确的是();THEEND