三氟乙酸水解
水解
方法1〔毛头鬼伞菌丝体粗提物的制备〕
〔1〕取2mg多糖样品放入薄壁长试管中,参加2mol/L三氟乙酸(TFA)4mL,在110℃下水解〔2〕多糖样品水解2h后,取试管内溶液减压蒸干(低于40℃)
然后参加3mL甲醇蒸干,重复以上操作4一5次,以完全除去TFA。
用超纯水溶解定容至100mL容量瓶,稀释100倍后上样测定。[1]凡军民.毛头鬼伞菌丝体多糖的分别、纯化和化学构造鉴定及生
物活性争论[D].南京农业大学,2025.方法2〔山药多糖的分级纯化〕
取10mg多糖参加3mL2mol/L的TFA溶液，封管100℃水解6小时
减压抽干参加3mL酸性甲醇液
减压抽干重复3次
然后参加3mL甲醇液甲醇抽干，以充分带走TFA。
[1]姜军.山药多糖的分别纯化及其化学构造的初步争论[D].扬州大学,2025.
方法3：(亚麻籽壳多糖的提取)
称取多糖样品5mg于安瓿管中,参加2mol/L三氟乙酸1.0
mL
在通有氮气的状况下用酒精喷灯封管,置于烘箱中120r水解
3h
再参加2.0mL甲醇,蒸干以完全去除三氟乙酸,反复3次,反
应后置枯燥皿中备用[1]毛丰玮.亚麻籽壳多糖的提取、分别纯化与构造
争论[D].浙江工商大学,2025.
方法4：〔山药多糖的GC-MS分析〕
取10mg多糖参加3mL2mol/L的TFA溶液
封管100℃水解6小时
减压抽干参加3mL酸性甲醇液，减压抽干重复3次
参加3mL甲醇液，抽干，以充分带走TFA
〔5〕水解产物参加0.6mL0.05mol/LNaOH溶液，再参加5mgNaBH4，室温下反响8~10小时
加少许乙酸分解过量的NaBH4，至无气泡产生为止，蒸干反响液，以酸性甲醇液洗涤反响产物，蒸干甲醇液，重复3次，以除去硼酸根
最终参加甲醇蒸干并于105℃烘箱中除去水分。
[1]姜军.山药多糖的分别纯化及其化学构造的初步争论[D].扬州大学,2025.
关键：TFA、甲醇的浓度、体积，蒸发次数
当多糖含有糖醛酸时,由于中性糖和酸性糖对酸水解的耐受不同,与糖醛酸连接的单糖很难被酸水解。糖醛酸的定量可使用比色分析法或查找需要其他的分析方法如GC-MS。含糖醛酸的多糖用氘代硼化钠复原后,再进展酸水解、衍生化,经GC-MS可以很好地定性糖醛酸类型。
测定衍生GC
方法1：〔山药多糖的GC-MS分析〕乙酰化衍生物：
取水解的单糖3mg
参加1mL的吡啶，1mL的乙酸酐，加热两个小时。
后减压抽干
参加氯仿，溶解用蒸馏水洗涤，分三次萃取，取氯仿层，加压抽干，得棕黄色产物，〔5〕此乙酰化的单糖醇用氯仿稀释后进展GC-MS分析。
GC-MS操作条件：DB-5MS柱〔30m×0.25mm×0.25μm〕柱温承受程序升温开头温度为120℃，以10℃/min速率升温至170℃；再以15℃/min升温至280℃；最终在280℃维持40分钟。MS条件：M/Z：50～550，电子流量70ev，EI源。
[1]姜军.山药多糖的分别纯化及其化学构造的初步争论[D].扬州大学,2025.
方法2：(亚麻籽壳多糖的提取)
参加10mg盐酸羟胺0.5mL吡啶,摇匀于90°C条件下水浴反响30min
参加1.OmL乙酸酐,90°C水浴30mm进展乙酰化反响
氮吹去除溶剂,参加1.0mL肌醇六乙酸醋内标溶液,进展GC分析。
标准单糖的衍生化分别称取鼠李糖、木糖、岩藻糖、半乳糖、甘露糖、阿拉伯糖和葡萄糖标准品10mg,参加10mg盐酸羟胺,1mL吡啶摇匀,90°C水浴30min,加1mL乙酸酐,90°C水浴30min进展乙酰化,氮气吹干溶剂,参加1mL肌醇六乙酸酯内标溶液,进展GC分析。气相色谱分析条件
HP7890,FED检测器,色谱柱为HP-INNOWAX柱(30mxO.25
mmxO.25um),恒流模式,流速为2mL/min,程序升温条件为:180°C保持1min,从180°C开头以5°C/min升温至210℃,保持lOmin,再以
1°C/min升温至230℃,保持5min。进样口承受分流模式,分流比为
10:1,进样口温度为270℃。检测器温度为270℃,检测器H2流速为30mL/min,空气流速为300mL/min,尾吹为25mL/min。进样量为1uL。
毛丰玮.亚麻籽壳多糖的提取、分别