;课标要求;考情分析;类型一PCR引物碱基序列的设计
1.土壤盐渍化影响水稻生长发育。将水稻耐盐碱基因OsMYB56导入不耐盐碱水稻品种吉粳88中，培育耐盐碱水稻新品种，过程①PCR扩增OsMYB56需要添加引物，应选用的引物组合为;A.5′－CTTGGATGAT－3′和5′－TCTGTTGAAT－3′
B.5′－CTTGGATGAT－3′和5′－TAAGTTGTCT－3′
C.5′－ATTCAACAGA－3′和5′－ATCATCCAAG－3′
D.5′－ATTCAACAGA－3′和5′－GAACCTACTA－3′;图中所示碱基序列磷酸端为5′端，羟基端为3′端，在进行PCR操作时，引物应分别与基因两条链的3′端结合，根据图中两端的碱基序列，通常选择5′－CTTGGATGAT－3′(上面链的引物)和5′－TCTGTTGAAT－3′
(下面链的引物)作为引物对，A符合题意。;2.(2021·湖北，16)某实验利用PCR技术获取目的基因，实验结果显示除目的基因条带(引物与模板完全配对)外，还有2条非特异条带(引物和模板不完全配对)。为了减少反应非特异条带的产生，以下措施中有效的是
A.增加模板DNA的量
B.延长热变性的时间
C.延长延伸的时间
D.提高复性的温度;增加模板DNA的量可以提高反应速度，但不能有效减少反应非特异条带的产生，A不符合题意；
延长热变性的时间不影响引物和模板配对，故不能有效减少反应非特异条带的产生，B不符合题意；
一般根据待扩增片段的长度适当延长延伸的时间，但延伸时间过长可能会出现非特异性扩增，C不符合题意；
复性温度过低会造成引物与模板的结合位点增加，故可通过提高复性的温度来减少反应非特异条带的产生，D符合题意。;3.以下两组引物设计的均不合理的原因是___________________________
_______________________________________________________________。;引物是一小段能与DNA母链的一段碱基序列互补配对的短单链核酸。引物设计的优劣对PCR反应的效率和特异性影响很大，引物设计的原则主要包括：
(1)引物长度一般为20～30bp，可定位目的基因并为子链的延伸提供3′端。
(2)引物中CG含量要适宜，CG含量越高，复性(退火)温度越高，产物特异性越高。
(3)引物自身、引物之间不能有连续4个碱基互补，否则引物会折叠成发夹结构或二聚体，影响引物与模板的复性结合。
(4)引物的5′端可以修饰(添加酶切???点、引入突变序列)，但3′端不可修饰(与模板DNA配对)。;类型二利用琼脂糖凝胶电泳鉴定PCR产物
4.(2024·黑吉辽，7)关于采用琼脂糖凝胶电泳鉴定PCR产物的实验，下列叙述正确的是
A.琼脂糖凝胶浓度的选择需考虑待分离DNA片段的大小
B.凝胶载样缓冲液中指示剂的作用是指示DNA分子的具体位置
C.在同一电场作用下，DNA片段越长，向负极迁移速率越快
D.琼脂糖凝胶中的DNA分子可在紫光灯下被检测出来;在凝胶中DNA分子的迁移速率与凝胶的浓度、DNA分子的大小和构象等有关，需根据待分离DNA片段的大小配制琼脂糖溶液，故琼脂糖凝胶浓度的选择需要考虑待分离DNA片段的大小，A正确；
凝胶载样缓冲液指示剂通常是一种颜色较深的染料，可以作为电泳进度的指示分子，B错误；
DNA片段的迁移速率与其大小成反比，且DNA在电场中从负极向正极移动，C错误；
琼脂糖凝胶中的DNA分子可在波长为300nm的紫外灯(不是紫光灯)下被检测，并且需染色，D错误。;1.DNA电泳鉴定中的“两液两剂”
两液：电泳缓冲液与凝胶载样缓冲液。电泳缓冲液能维持整个电泳体系的pH稳定，提供导电介质；凝胶载样缓冲液可影响物质的电泳迁移速率，主要用于样品的稀释和保护，同时通过指示剂指示样品在凝胶中的位置。
两剂：核酸染料与指示剂。核酸染料是用来染色DNA或RNA分子的一种化学物质，以便在紫外灯下观察和检测核酸条带，最常用的核酸染料是溴化乙锭。最常用的指示剂是溴酚蓝，它在电泳凝胶中的迁移速度与DNA或RNA分子的迁移速度相近。在电泳过程中，溴酚蓝通常位于样品的前沿，形成一个明显的蓝色条带，这有助于实验者判断电泳是否完成，以及何时停止电泳。;2.DNA迁移速率的影响因素
(1)凝胶浓度：凝胶浓度的高低影响凝胶介质孔隙的大小，浓度越高，孔隙越小，DNA迁移受到的阻力越大，速率越慢。
(2)DNA分子的大小：DNA的分子量越大，迁移速率越慢。
(3)DNA分子的构象：三种构象的质粒在琼脂糖凝胶电泳的前后顺序为环形超螺旋(DNA两条链都是完整的质粒)线形开环(DNA双链断了一条成为松弛的环)。;类型三利用PCR技术鉴定目的基因的连接方式——正向连接和反向连接
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