(19)中华人民共和国国家知识产权局
(12)发明专利申请
(10)申请公布号CN111733187A
(43)申请公布日2020.10.02
(21)申请号202010866932.XC12N7/01(2006.01)
C12N5/10(2006.01)
(22)申请日2020.08.26
(71)申请人和元生物技术（上海）股份有限公司
地址201321上海市浦东新区中国(上海)
自由贸易区张江路1238弄1号6层B、C、
D、E座
(72)发明人杨兴林贾国栋潘讴东杨佳丽
马佩敏夏清梅
(74)专利代理机构北京纪凯知识产权代理有限
公司11245
代理人陆惠中田欢
(51)Int.Cl.
C12N15/867(2006.01)
C12N15/864(2006.01)
C12N15/113(2010.01)权利要求书1页说明书7页
序列表3页附图5页
(54)发明名称
一种WPRE突变体病毒载体及其应用
(57)摘要
本发明属于病毒载体领域，具体涉及一种
WPRE突变体病毒载体及其应用，所述WPRE突变体
病毒载体包括WPRE突变体?03，其核苷酸序列如
SEQIDNO：3所示，其构建方法包括：S1：制备随
机突变目的片段；S2：随机突变目的片段与能表
达荧光蛋白的目的载体连接；S3：涂平板后流式
细胞仪筛选细胞；S4：抽提筛选得到的细胞基因
组，使用PCR技术扩增WPRE区域；S5：连接T载体后
涂板获得克隆细胞，进行测序，得到WPRE突变体
病毒载体。本发明中发明人通过大量的创新性劳
动，设计并构建了一个WPRE随机点突变病毒文
库，通过文库筛选发现一种新的WPRE突变体病毒
载体，其对病毒包装有明显促进作用。
A
7
8
1
3
3
7
1
1
1
N
C
权利要求书
CN111733187A1/1页
1.一种WPRE突变体病毒载体，其特征在于，包括WPRE突变体-03，所述WPRE突变体-03的
核苷酸序列如SEQIDNO：3所示。
2.根据权利要求1所述的WPRE突变体病毒载体，其特征在于，所述WPRE突变体病毒载体
为WPRE突变体慢病毒载体或WPRE突变体腺相关病毒载体。
3.一种病毒颗粒，其特征在于，包含权利要求1所述的WPRE突变体病毒载体。
4.一种细胞，其特征在于，所述细胞包含权利要求1所述的WPRE突变体病毒载体。
5.根据权利要求1所述的WPRE突变体病毒载体在提高病毒滴度中的应用。
6.一种利用权利要求1所述的WPRE突变体病毒载体进行病毒包装的方法，其特征在于，
包括：
（1）培养待转染细胞；
（2）制备含有权利要求1所述的WPRE突变体病毒载体的DNA-转染试剂复合体；
（3）将DNA-转染试剂复合体加入到细胞培养容器中，5-7h后弃去培养基，再加入新鲜的
完全培养基培养。
7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述细胞为293T细胞。
8.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述完全培养基为Opti-MEM培养基。
2
说明书