3?、另取1mL灭菌吸管，按上项操作顺序，制10倍递增稀释液，如此每递增稀释一次即换用1支1mL吸管。第14页，共50页，星期日，2025年，2月5日4、根据标准要求或对污染情况的估计，选择2～3个适宜稀释度，分别在制作10倍递增稀释的同时，以吸取该稀释度的吸管移取1ml稀释液于灭菌平皿中，每个稀释度做两个平皿。同时分别取1ml稀释液（不含样品）加入两个灭菌平皿内作空白对照。第15页，共50页，星期日，2025年，2月5日5?、稀释液移入平皿后，将冷却至46℃琼脂培养基注入平皿约15～20ml，并转动平皿，混合均匀。第16页，共50页，星期日，2025年，2月5日6、?待琼脂凝固后，翻转平板，置36±1℃温箱内培养48±2h，水产品30±1℃温箱内培养72±3h。如样品中可能含有在琼脂培养基表面弥漫生长的菌落时，可在凝固后的琼脂表面覆盖一薄层琼脂培养基（约4毫升），凝固后培养。第17页，共50页，星期日，2025年，2月5日第18页，共50页，星期日，2025年，2月5日（二）?菌落记录方法
做平板菌落数记录时，可用肉眼观察，必要时用放大镜检查，以防遗漏。在记下各平皿的菌落总数后，求出同稀释度的各平板平均菌落数。到达规定培养时间，应立即计数。如果不能立即计数，应将平板放置于0～4℃，但不要超过24h。
第19页，共50页，星期日，2025年，2月5日
1、?平皿菌落数的选择
选取菌落数在30～300之间的平板作为菌落总数测定标准。每一个稀释度应采用两个平皿，大于300的可记为多不可计。第20页，共50页，星期日，2025年，2月5日2、其中一个平板有较大片状菌落生长时，则不宜采用，而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数；若片状菌落不到平板的一半，而其余一半中菌落分布又很均匀，则可以计算半个平板后乘以2，以代表一个平板的菌落数。第21页，共50页，星期日，2025年，2月5日3、当平板上有链状菌落生长时，如呈链状生长的菌落之间无任何明显界限，则应作为一个菌落计，如存在有几条不同来源的链，则每条链均应按一个菌落计算，不要把链上生长的每一个菌落分开计数。第22页，共50页，星期日，2025年，2月5日（三）菌落总数的计算1、若只有一个稀释度平板上的菌落数在适宜计数范围内，计算两个平板菌落数的平均值，再将平均值乘以相应稀释倍数，作为每g（mL）中菌落总数结果。第23页，共50页，星期日，2025年，2月5日第24页，共50页，星期日，2025年，2月5日2、若有两个连续稀释度的平板菌落数在适宜计数范围内时，按如下公式计算：
N=∑C/（n1+0.1n2）d…………（1)
式中：
N―样品中菌落数；
∑C―平板（含适宜范围菌落数的平板）菌落数之和；
nl―第一个适宜稀释度平板数；
n2―第二个适宜稀释度平板数；
d―稀释因子（第一稀释度）。第25页，共50页，星期日，2025年，2月5日例如：
稀释度?1:100（第一稀释度）?1:1000（第二稀释度）
菌落数????232，244???33，35
232+244+33+35(2+0.1×2)×10-2=544/0.022=24727四舍五入表示为:2.5×104第26页，共50页，星期日，2025年，2月5日第27页，共50页，星期日，2025年，2月5日3、?若所有稀释度的平板菌落数均300，则取最高稀释度的平均菌落数乘以稀释倍数计算。第28页，共50页，星期日，2025年，2月5日第29页，共50页，星期日，2025年，2月5日4、若所有稀释度平板菌落数均30，则以最低稀释度的平均菌落数乘稀释倍数计算。5、若所有稀释度平板均无菌落生长，则应按1乘以最低稀释倍数计算。第30页，共50页，星期日，2025年，2月5日第31页，共50页，星期日，2025年，2月5日6、若所有稀释度均不在30～300之间，有的300，有的又30，则应以最接近300或30的平均菌落数乘以稀释倍数计算。第32页，共50页，星期日，2025年，2月5日（四）?菌落计数