植物组织培养技术灭菌方法无菌操作技术;本节教学重点、难点:;第一节外植体得选择和消毒;外植体(叶)得各个部分其芽、苗再生能力也很不相同;二、灭菌与消毒;菌类:
细菌、真菌、放线菌、藻类及其她微生物。
茵得特点:
☆极小,肉眼看不见;
☆无处不有,适应能力强;
☆繁殖力极强,条件适宜时便可大量滋生。
消毒:
指杀死、消除或充分抑制部分微生物,使之不再发生危害作用得过程。
;(二)常用得灭菌与消毒方法;1、湿热灭菌(培养基);2、灼烧灭菌(用于无菌操作得器械);3、干热灭菌(玻璃器皿及耐热用具);4、过滤灭菌(不耐热得物质);大家学习辛苦了，还是要坚持;5、紫外线和熏蒸灭菌(空间);6、喷雾灭菌(物体表面);7、植物材料表面用消毒剂灭菌√;第二步:就是对材料得表面浸润灭菌。;3、化学灭菌剂处理
消毒剂消毒原理:利用氯气、重金属、原子态氧来杀菌。;
第三步、无菌水涮洗
——就是免除消毒剂杀伤植物细胞得副作用。
☆灭菌后用无菌水涮洗3～4次即可;
☆升汞残毒较难去除,所以应当用无菌水涮洗6～10次。;第二节外植体得接种和培养;(一)无菌操作步骤(实验课)
(1)接种室消毒:在接种前用甲醛熏蒸接种室,在接种前20min,打开超净工作台得风机以及台上得紫外灯
(2)摆放接种用具:将培养基、接种用具等分别防入小推车或超净工作台上(无菌水、镊子、解剖刀、酒精棉、酒精灯、培养皿、小烧杯等)
(3)进入接种室:接种员先洗净双手,在缓冲间换好专用实验服,并换穿拖鞋等;
(4)手及台面消毒:用70%酒精棉球擦拭双手,特别就是指甲处。然后按一定顺序擦拭工作台面;
(5)培养材料灭菌:将接种材料预先放入烧杯,置入超净台进行表面消毒。
(6)接种用具灭菌:先用酒精棉球擦拭接种工具,再将镊子和剪子浸泡在95%酒精并取出从头至尾过火一遍,然后反复过火尖端处,对培养皿要过火烤干;
(7)接种完毕后要清理干净工作台,可用紫外灯灭菌30min。
注:接种时,接种员双手不能离开工作台,不能说话、走动和咳嗽等;若连续接种,每5天要大强度灭菌一次。;(二)接种技术(实验课);第二节外植体得接种和培养;1、培养方法
;2、培养步骤;2、培养步骤;2、培养步骤;;3、培养过程中常出现得
问题及解决方法
(第四章植物组织培养中常见问题及解决办法);4、植物组织培养得环境条件;温度(temperature)
;光照(light);湿度(humidity);渗透压(penetratingpressure);pH值(pHvalue)