临床少见苛养菌的分离培养鉴定及药敏实验
一、苛养菌的定义
·一大类
·对生长环境、营养要求较苛刻
·普通环境中不能或难以生长
·体外培养需添加特殊因子或其他营养成分
Challenges
Challenges
Growthofbacteriahavingdifferenphysicochemicalproperties
Overgrowth
Fastidiousbacterialspecies
Answers
Answers
VariousTemperature
Atmosphere(aerobe,anacrobeincludinganaerobecabinet,Microaerophile)
Antibiotics
Filtration
Killthewinner
Phages
Thermicshock
Pre-incubationinbloodculturebottle,Rumenfluid
嗜血杆菌属
鲍特菌属
肺炎链球菌卡他莫拉菌
弯曲菌属
·常见苛养菌幽门螺杆菌
·常见苛养菌
脑膜炎奈瑟氏菌
艰难梭菌
各种厌氧菌分支杆菌属
二、苛养菌生活条件
口普通菌环境与温度口苛养菌特殊要求
温度要求低：37℃恒温培养环境要求低：需氧条件或+10%CO2
培养时间短：18-24h易保存
温度要求高：28℃,42℃微需氧或严格厌氧
培养时间长：5-7天，甚至可达一个月
普通条件下保存存活率低
·营养要求
口普通细菌
普通血平板生长良好普通筛选平板即可：
√巧克力平板
√XLD平板
√麦康凯平板
√中国蓝平板等等
口苛养菌
因子：V因子，X因子
碳粉琼脂
各种选择性生长因子
各种抗生素：抑制杂菌
各种筛选平板
苛养菌的神秘面纱.
三、苛养菌不苛养
●临床是否有需求，细菌室亟待开展吗
了解临床需
●标本的采集与运送，方法对了吗
加强临床沟通
●苛养“君”要的条件满足了吗
苛养君条件
标本采集至关重要：加强临床沟通
平板选择的重要性
四、鲍特菌属
1、百日咳
由百日咳鲍特菌引起的严重急性呼吸道传染病主要通过飞沫传播
主要为5岁以下婴幼儿，尤其新生儿
百日咳的发病率和病死率均较高
√WHO估计，每年1600万百日咳患者√95%在发展中国家
√其中有19.5万例死亡
是一种疫苗可预防性疾病
百日咳疫苗
百白破疫苗：全细胞疫苗-无细胞疫苗我国现行计划免疫策略
√3、4、5月，18-24月加强一针
√未免疫人群
孕妇接种可有效保护未免疫婴幼儿
计划免疫策略更改：
A.WHO:高危地区首次DTP接种年龄可提前至6-8
周
B.美国CDC:推荐DTP免疫起始年龄为2月龄
C.我国：尚需进一步的研究
加强免疫方案：
√DTP的免疫保护力仅能维持4-12年
√失去免疫保护的青少年和成人成为婴儿百日咳潜在的传染源
√2014年ACIP推荐：密切接触1岁以下婴儿的人群在接触前2周实施预防接种
√我国尚没有针对加强免疫方案
2、博特菌属
8个种：
·百日咳博特菌：百日咳
·副百日咳博特菌：类百日咳
·霍氏博特菌：
·禽类博特菌
少见·支气管炎博特菌
少见
·欣氏博特菌
·派氏博特菌
·特曼博特菌
表达多种毒力因子
·百日咳毒素(PT)
·状血细胞凝集素(FHA)
·百日咳黏附素·菌毛
·腺苷酸环化酶溶血素
·脂多糖(LPS)
疫苗相关成分
3、百日咳鲍特菌
·培养特性●菌落和生物学特征
卵圆形短小杆菌，无鞭毛、芽胞革兰染色阴性
37℃,专性需氧
生长缓慢，需延长至5天初次分离培养营养要求高需用碳琼脂培养基
菌落：细小、圆形、光滑、凸起、灰白色不透明菌落
生化反应弱
√不发酵糖类
√过氧化氢酶(+)触酶(+)√吲哚-枸橼酸盐-脲酶-
4、百日咳鲍特菌分离培养与鉴定
1)培养基的制备
·25.5g培养基干粉(CMO119)溶于500ml蒸馏水，
121℃作用15分钟，凉至50℃,加入50ml脱纤维羊血。
·取一支附加试剂(SRO082,每支含头孢氨苄
20.0mg)溶于2ml蒸馏水，溶解后，加入上述备用培养基，混匀后倾注无菌平皿(9cm平皿，厚度
4mm)
·4-8℃冰箱密封保存
碳琼脂培养基(Code:CM0119)
组分
克/升(gm/litre)
Lab-Lemcopowder(牛肉浸粉)
10
蛋白胨
10
淀粉
10
细菌学木炭
4
氯化钠
5
烟酸
0.001
琼脂粉
12
pH7.4±0.