;［热点归纳］
1.概念
PCR是聚合酶链式反应的缩写，它是一项根据DNA半保留复制原理，在体外提供参与DNA复制的各种组分与反应条件，迅速扩增DNA片段的技术，它能以极少量的DNA为模板，在短时间内复制出上百万份的DNA。
;2.PCR的原理
（1）DNA分子的热变性原理。
当温度超过90℃时，DNA的双螺旋结构将解体，双链分开，这个过程称为变性。温度缓慢降低到50℃左右时，两条彼此分离的DNA链重新结合成双链，这个过程称为复性。
DNA双链DNA单链
;（2）耐高温的DNA聚合酶。
高温解决了打开双链的问题，但是，又导致DNA聚合酶失活的问题，耐高温的DNA聚合酶解决了高温导致DNA聚合酶失活的问题，促成了PCR技术的自动化。
;（3）关于引物。
①概念：引物是一小段能与DNA母链的一段碱基序列互补配对的短单链核酸。用于PCR的引物长度一般为20~30个核苷酸。
②作用：使DNA聚合酶能够从引物的3端开始连接脱氧核苷酸，见下图：;?;（4）PCR（体外的DNA复制）的条件。
①控制温度，但不需解旋酶。
②DNA模板。
③原料：dNTP，包含dATP、dCTP、dGTP、dTTP，除提供原料外，还提供能量。
④耐高温的DNA聚合酶。
⑤分别与两条模板链相结合的两种引物。
⑥需要在一定的缓冲液中进行。
;3.PCR的过程
;（1）一般情况下，DNA模板链较长，需要PCR扩增的基因只是DNA模板链的一段。
（2）第一轮循环，两引物与模板链互补，DNA分子模板链最长，新合成的DNA单链（含有引物的链）较短。
（3）第二轮循环，以含有引物的母链为模板合成的DNA分子，会出现含有引物的DNA，其中新合成的单链b会比母链量更短，其实b就是我们所需扩增的目的基因的长度，只是b为单链。
（4）第三轮循环，以b为模板合成的DNA片段就是目的基因片段的长度。
;（5）结果分析。
①两条单链等长DNA（目的基因）从第三轮循环开始出现（甲、乙）。随循环次数的增加，目的基因含量会不断增加。
②通过以上分析可知，PCR反应的产物不都是所需的目的基因片段，除目的基因外，还会存在四种类型的DNA分子（这四种类型同第二轮循环产生的4个DNA分子）。
③DNA聚合酶只能特异性地复制处于两个引物??间的DNA序列，等长DNA（目的基因）从第三轮循环开始出现，随着循环次数的增多，呈指数扩增。
;4.PCR的应用
现在PCR技术已广泛应用于遗传病的诊断、刑侦破案、古生物学、基因克隆和基因测序等。;【典例】如果已知一小段DNA的序列，可采用PCR的方法，简捷地分析出已知序列两侧的序列，具体流程如图（以EcoRⅠ酶切为例）：
;请据图回答问题。
（1）步骤Ⅰ用的EcoRⅠ主要存在于生物中，限制酶存在于该类生物中的主要作用是。?
（2）步骤Ⅱ用的DNA连接酶催化相邻核苷酸之间的3-羟基与5-磷酸间形成；PCR每次循环一般可分为（按顺序书写）三步，其中第二步的目的是。
;（3）若下表所列为已知的DNA序列和设计的一些PCR引物，步骤Ⅲ选用的PCR引物必须是（从引物①②③④中选择，填编号）。?
;（4）对PCR产物测序，经分析得到了片段F的完整序列。下列DNA单链序列中（虚线处省略了部分核苷酸序列），结果正确的是。?
A.5-AACTATGCG……AGCCCTT-3
B.5-TTGATACGC……CGAGTAC-3
C.5-GCAATGCGT……TCGGGAA-3
D.5-AATTCCATG……CTGAATT-3;【解析】（1）步骤Ⅰ用的EcoRⅠ是一种限制酶，主要存在于原核生物中，它能够识别双链DNA分子的某种特定核苷酸序列，进而在特定部位将双链DNA切开，显然限制酶在原核生物中能切割外源DNA，保证自身安全。（2）步骤Ⅱ用的是DNA连接酶，DNA连接酶催化形成的是磷酸二酯键，即催化相邻核苷酸之间的3-羟基与5-磷酸间形成磷酸二酯键；PCR循环包括变性、复性和延伸三步，该过程中升温到95℃是为了使DNA变性解旋，进而获得DNA单链，其中第二步复性是指引物与两条模板DNA单链结合，进而为后续的延伸做准备。;（3）由于DNA聚合酶只能从5→3方向催化子链延伸，根据碱基互补配对原则可知，引物①是以目的基因下边那条链的左端为模板向右侧延伸，引物②是以目的基因上边那条链为模板的右端向左侧延伸，引物③是以目的基因下边那条链的右端为模板向右侧