第1页，共26页，星期日，2025年，2月5日第五章核酸的提取分离§5.1概述§5.2核酸的理化性质§5.3核酸的作用与用途§5.4动物脏器核酸的提取分离方法§5.5转移因子的制备§5.6辅酶A的提取§5.7复合辅酶的提取§5.8从啤酒酵母中提取RNA第2页，共26页，星期日，2025年，2月5日§5.1概述核酸（nucleicacid)核苷酸(nucleotide)磷酸(phosphoricacid)核苷(nucleoside)戊糖(pentose)碱基(base)第3页，共26页，星期日，2025年，2月5日组成核苷酸的碱基第4页，共26页，星期日，2025年，2月5日Fig.2-4TheprimarystructureofDNA.第5页，共26页，星期日，2025年，2月5日脱氧核糖核酸（DNA）主要存在于细胞核的染色体中，核糖核酸（RNA）主要存在于细胞的微粒体中，各种生物体含有核酸的多少不同应用于临床的核酸及其衍生物类生化产品越来越多我国人工合成丙氨酸转移核糖核酸，76个核苷酸，与天然酵母丙氨酸核糖核酸具有相同的化学结构，有接受丙氨酸、将携带的丙氨酸掺入到蛋白质中的生物活力第6页，共26页，星期日，2025年，2月5日呈味核苷酸是目前国际上流行的新型鲜味剂，其学名为5－IMP（肌苷酸钠）、5－GMP（鸟苷酸钠）、I＋G（50％IMP＋50GMP），我国第三代鲜味剂鸡精的特点为：由鸡肉、鸡蛋、呈味核苷酸、水解蛋白粉、味精及多种调味料复合而成。核酸类的药物主要是核苷酸、嘌呤及嘧啶类相关的衍生物保健品：某核酸公司宣称其产品具有增强基因自主修复能力，还能改善微循环、改善脑机能；促进新陈代谢、抗疲劳；提高免疫力；活化皮肤细胞、润肤美容。核酸在食品和药品领域中的应用？第7页，共26页，星期日，2025年，2月5日核酸工业的市场分析核酸药物产品的开发已有近70年历史。目前，日本是核酸产品的最大生产国，其年产量约7500吨，约占世界产量的90%；西方国家中，意大利也有核酸产品，但产量不是很大。近年来，韩国核酸产业兴起，主要为调味品。我国核酸产品的研究开发起步较早，并取得了令人瞩目的成就。然而目前我国核酸药物产品主要依靠进口，仅ATP一项每年就从日本进口金额达八千万美元第8页，共26页，星期日，2025年，2月5日§5.2核酸的理化性质§5.2.1核酸的一般性质1、DNA分子与蛋白质分子、RNA相对分子质量？2、DNA白色纤维状固体，RNA白色粉末，均微溶于水，稀碱溶液中成盐后易溶于水，不溶于有机溶剂，但可溶于乙醇的水溶液，乙醇＞50％（w/w）时，DNA析出，当＞75％时，RNA也沉淀出来→溶解度差别分离≥106几千到百万几万到几百万第9页，共26页，星期日，2025年，2月5日盐溶液中溶解度差异提取RNA时NaCl盐溶液浓度仅为0.14mol/L即可而提取DNA时，需先用0.14mol/LNaCl将RNA除掉，再继续增加NaCl浓度至1mol/L时才能够将DNA提取出来第10页，共26页，星期日，2025年，2月5日§5.2.1核酸的一般性质3、DNA极稀的溶液黏度极大，变性时黏度降低，pH超出5.6-10.9时，相对黏度突然降低4、可被酸、碱或酶水解成各种组分，用层析、电泳等方法分离，主要利用：RNA的磷酸酯键对碱敏感：室温，0.3~1mol/LKOH，24h，可将RNA完全水解，得到2’-或3’-核苷酸的混合物。★DNA抗碱水解★生理意义：DNA更稳定，遗传信息。RNA是DNA的信使，完成任务后迅速降解。第11页，共26页，星期日，2025年，2月5日§5.2.2核酸的紫外吸收性质嘌呤、嘧啶环→共轭双键→紫外吸收，核酸λmax260nm附近，而λmin230nm1、鉴定纯度纯DNA的A260/A280≥1.8；纯RNA的A260/A280≥2.0若溶液中含有杂蛋白或苯酚，则A260/A280↓2、含量计算，吸光值为1.00时，相当于：50ug/mL双螺旋DNA或：40ug/mL单链DNA（或RNA）或：20ug/mL寡核苷酸第12页，共26页，星期日，2025年，2月5日DNA和RNA均在紫外光下有最高吸收峰，可采用OD260nm测定其浓度另一方面DNA和RNA含磷含糖，所以可通过糖含量及磷含量的测定方法间接表征核酸的含量RNA所含糖为核糖→苔黑酚法测定；DNA所含糖为脱氧核糖→二苯胺法测定。含磷量测定时均需先经