第1页，共26页，星期日，2025年，2月5日一、基础知识：
(一)微生物90%以上的微生物是对人类有利的。如抗生素多数来源放线菌和霉菌；酒由酵母菌发酵产生，腐乳由红曲霉和毛霉发酵制成；微生物也能消除环境污染，在新能源领域将发挥巨大作用。病毒、细菌、放线菌、真菌、原生动物第2页，共26页，星期日，2025年，2月5日实验1大肠杆菌的分离和培养第3页，共26页，星期日，2025年，2月5日一、大肠杆菌的概述第4页，共26页，星期日，2025年，2月5日菌落：单个或少数细菌在固体培养基上大量繁殖时，就会形成一个肉眼可见的，具有一定形态结构的子细胞群体，叫做菌落。菌落是鉴定菌种的重要依据。第5页，共26页，星期日，2025年，2月5日二、培养基培养基（培养液）是由人工方法配制而成的，专供微生物生长繁殖使用的混合营养液。1.培养基的营养物质2.培养基的类型和用途3.配制培养基的原则第6页，共26页，星期日，2025年，2月5日三、无菌技术1.无菌技术的概念①对实验操作空间、操作者的衣着和手进行清洁和消毒；②将培养器皿、接种用具和培养基等器具进行灭菌；③为避免周围微生物污染，实验操作应在酒精灯火焰旁进行；④避免已灭菌处理的材料用具与周围的物品相接触。只有胆大心细，操作快捷，熟练、规范地进行无菌操作，才可能成功地培养微生物。第7页，共26页，星期日，2025年，2月5日1、煮沸消毒法:100℃煮沸5-6min2、化学药剂消毒法:用75%酒精、新洁尔灭等进行皮肤消毒;氯气消毒水源3、紫外线消毒……(1)消毒的方法：利用化学或物理方法，杀死大部份致病微生物的过程。第8页，共26页，星期日，2025年，2月5日（2）灭菌的定义：以化学剂或物理方法消灭所有微生物，包括所有细菌的繁殖体、芽孢、霉菌及病毒，而达到完全无菌之过程。
第9页，共26页，星期日，2025年，2月5日1、灼烧灭菌2、高压蒸气灭菌：100kPa、121℃下维持15-30min.3、过滤灭菌法4、紫外光灭菌法5、化学灭菌法(2)灭菌的方法：第10页，共26页，星期日，2025年，2月5日1.无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外，还有什么目的？2.请你判断以下材料或用具是否需要消毒或灭菌。如果需要，请选择合适的方法。（1）培养细菌用的培养基与培养皿（2）玻棒、试管、烧瓶和吸管（3）实验操作者的双手答：无菌技术还能有效避免操作者自身被微生物感染。答：（1）、（2）需要灭菌；（3）需要消毒。第11页，共26页，星期日，2025年，2月5日四、实验操作1.制备LB（液体和固体）培养基（用于培养细菌）第12页，共26页，星期日，2025年，2月5日1．计算、称量2．溶化3．调pH：pH7．6操作步骤第13页，共26页，星期日，2025年，2月5日4．灭菌:将50ml培养基用玻棒转移至三角锥瓶中，塞上棉花塞，包上牛皮纸，再放入高压蒸气灭菌锅，在压力为100kPa、温度为121℃，灭菌15～30min。将培养基用旧报纸包裹，放入干热灭菌箱内，在160～170℃下灭菌2h。5．倒平板:待培养基冷却到50℃左右时，在酒精灯附近倒平板。（倒平板操作见课本）2d后观察平板，无杂菌污染才可用来接种.(试管斜面的制作方法类似)6．无菌检查：将灭菌的培养基放入37℃的温室中培养24—48小时，以检查灭菌是否彻底。第14页，共26页，星期日，2025年，2月5日倒平板技术第15页，共26页，星期日，2025年，2月5日1.培养基灭菌后，需要冷却到50℃左右时，才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温度？问题讨论答：可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时，就可以进行倒平板了。2.为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？答：通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。第16页，共26页，星期日，2025年，2月5日2、大肠杆菌的扩大培养自学课本P23第17页，共26页，星期日，2025年，2月5日3、分离大肠杆菌（除杂）1、方法：平板划线法和稀释涂布平板法平板划线法:通过接种环在琼脂固体培养基表面连续画线的操作,将聚集的菌钟逐步稀释分散到培养基的表面.第18页，共26页，星期日，2025年，2月5日第19页，共26页，星期日，2025年，2月5日