金洗样IFA--快速检测（渗滤法）示意图第95页，共105页，星期日，2025年，2月5日ICA--间接法测抗体ICA--双抗体夹心法测抗原四、免疫层析试验immunochromatographyassay,ICA样品垫结合物垫NC膜吸水垫第96页，共105页，星期日，2025年，2月5日阳性阴性无效ICA结果观察第97页，共105页，星期日，2025年，2月5日第98页，共105页，星期日，2025年，2月5日五、斑点酶免疫吸附试验
dotenzymelinkedimmunosorbentassay,Dot-LISA第99页，共105页，星期日，2025年，2月5日六、酶联免疫斑点试验enzymelinkedimmunospot,ELISPOT细胞受到刺激后局部产生细胞因子，此细胞因子被特异单克隆抗体捕获。细胞分解后，被捕获的细胞因子与生物素标记的二抗结合，其后再与碱性磷酸酶标记的亲和素结合。BCIP/NBT底物孵育后，PVDF孔板出现“紫色”的斑点表明细胞产生了细胞因子，通过CTL公司生产的ELISPOT酶联斑点分析系统对斑点的分析后得出结果。第100页，共105页，星期日，2025年，2月5日第101页，共105页，星期日，2025年，2月5日ELISPOT结果判断第102页，共105页，星期日，2025年，2月5日第103页，共105页，星期日，2025年，2月5日Westernblot——抗原表位可能被破坏而漏检七、免疫印迹法--Westernblot第104页，共105页，星期日，2025年，2月5日感谢大家观看*第105页，共105页，星期日，2025年，2月5日寄生虫（猴胚肾细胞内弓形虫）细菌（藤黄微球菌)2、病原体检测第63页，共105页，星期日，2025年，2月5日肿瘤（人肝癌细胞）3、免疫病理检测第64页，共105页，星期日，2025年，2月5日4、细胞表面抗原和受体检测荧光免疫技术可用于淋巴细胞表面CD抗原、抗原受体、补体受体、Fc受体等的检测以及淋巴细胞及其亚群的鉴定和计数。第65页，共105页，星期日，2025年，2月5日酶标抗体（抗原）与抗原（抗体）的特异性反应酶对底物的显色反应对抗原或抗体进行定位、定性或定量的测定分析第四节酶免疫测定一、基本原理第66页，共105页，星期日，2025年，2月5日（一）常用的酶及其底物1、辣根过氧化物酶（HRP）多用于ELISA方法。四甲基联苯胺TMB。反应后显蓝色，加酸终止反应后变为黄色,测定波长450nm，稳定，无致癌性。2、碱性磷酸酶（AP）对-硝基苯磷酸酯（pNPP）。经酶作用后的产物为黄色对硝基酚，最大吸收峰波长为405nm。3、β-半乳糖苷酶（β-Gal）多用于均相酶免疫测定。4MUG。经酶作用后生成高强度荧光物，用荧光计测量。第67页，共105页，星期日，2025年，2月5日（二）固相载体及其处理1、常用的固相载体塑料制品、微颗粒、膜载体。通过固相载体可以方便的将非均相酶免技术中游离的和结合的抗体（或抗原）酶标记物迅速分离。第68页，共105页，星期日，2025年，2月5日2、固相载体的处理⑴包被（coating）：将抗原或抗体结合于固相载体。⑵封闭（blocking）：用1%-5%的牛血清白蛋白或5%-20%小牛血清消除固相载体表面未结合的位点，消除非特异性吸附。第69页，共105页，星期日，2025年，2月5日酶免疫技术酶免疫组化酶免疫测定均相非均相固相酶免疫测定液相酶免疫测定组织切片或其它标本中抗原的定位液体标本中抗原或抗体的定性和定量（三）酶免疫技术分类第70页，共105页，星期日，2025年，2月5日均相酶免疫测定主要用于药物和小分子物质的检测。非均相免疫测定中的ELISA应用更为广泛。常用于传染病的诊断：病毒性肝炎（甲肝抗体、“乙肝三对”、丙肝抗体、戊肝抗体）、风疹病毒、疱疹病毒、轮状病毒；结核杆菌、幽门螺杆菌。也用于一些蛋白质的检测：各种免疫球蛋白、补体、肿瘤标志物（甲胎蛋白、癌胚抗原、前列腺特异性抗原）。（三）酶免疫测定的应用第71页，共105页，星期日，2025年，2月5日酶标记物与相应的抗原或抗体结合后，标记酶的活性会发生改变，不用分离结合和游离酶标记物，通过测定标记酶的活性的改变，而确定抗原或抗体的含量。常用于小分子激素和半抗原（如药物）的测定。二、均相酶免疫测定第72页，共105页，星期日，2025年，2月5日1、酶放大免疫测定技术EMITenzyme