GB/T19167-2003
言
前
传染性囊病CIBD)又名鸡传染性法氏囊病、腔上囊炎、甘布罗病,是由双RNA病毒科禽双RNA病
毒属的传染性囊病病毒(!BDV)引起的鸡和火鸡的-种急性、高度接触传染性疫病。
本标准参考了世界动物卫生组织[WorldOrganizationforAnimalHealth(英),OfficeInternational
des
Epizooties(法),OIE]的《哺乳动物、禽、蜜蜂A和B类疾病诊断试验和疫苗标准手册》所推荐的
方法。
本标准的附录A为规范性附录。
本标准由中华人民共和国农业部提出。
本标准由全国动物检疫标准化技术委员会归口,
本标准由北京市农林科学院畜牧兽医研究所负责起草,由广西兽医研究所协作起草。
本标准主要起草人z为j有昌、刘离、周蚊、姚炜光、张方亮、贺荣莲、吴健敏、兰美益、黄红梅、蒋冬福、
韦志锋。
I
GB/T19167-2003
传染性囊病诊断技术
1范固
本标准规定了传染性囊病病毒的病原分离、抗原的检测和检测特异性抗体的琼脂凝胶免疫扩散试
验、病毒血清微量中和试验、酶联兔疫吸附试验的技术要求。
本标准适用于传染性囊病的诊断与检疫.
2病毒的分离及其鉴定
2.1材料准备
灭菌组织研磨器、离心机、37℃温箱、孵化器、灭菌吸管、橡胶吸头、灭菌小瓶、灭茵俨针头、灭菌注
射器、石蜡。
2.2病料的采集和处理
采集具有病变的新鲜法氏囊,用加有抗生素(3000IU/mL青霉素和3000μg/mL链霉素)的膜蛋
白酶磷酸缓冲液或生理盐水和j成20%的组织匀浆液,在37℃作用30min~60min,1500r/min离心
20min,收集上清液。经菌检培养为阴性后作为接种材料。
2.3鸡胚接种
2.3.1接种
将收集的上清液以每只0.2mL的量经绒毛尿囊膜接种9日龄~11日龄无传染性囊病母源抗体鸡
胚或SPF鸡胚(无特定病原体鸡胚),接种后用石蜡封住接种孔。37℃孵育,每天照蛋检查,弃去24h内
死亡的鸡胚。
2.3.2鸡胚膏j输结果判定
2.3.2.1标准IBDV分离物接种后判定·标准的IBDV分离物接种鸡胚后3d~5d可致鸡胚死亡。死
亡鸡胚充血,在羽毛囊、趾关节和大脑有血斑性出血。肝脏多可见坏死,也可见色淡似熟肉样。
2.3.2.2IBDV变异株分离物接种后判定:IBDV变异株经绒毛尿囊膜接种鸡胚,一般不致死鸡胚,接
种后5d~6d{!lJ检,可见鸡胚大脑和腹部皮下水肿、发育迟缓、呈灰白色或奶油色,肝脏常有胆汁着色
或坏死,脾脏通常肿大2倍~3倍,但颜色无明显变化。
2.4易感雏鸡接种试验
2.4.1接种
取2.2述及的病料上清液0.5mL,经点眼、口服感染5只14日龄~21日龄无IBDV母源抗体鸡或
SPF鸡。同时设健康对照组。接种3d后将鸡剖杀,检查法氏囊及脾脏。
2.4.2剖检接种结果
2.4.2.1标准IBDV接种结果z接种后偶见鸡死亡,剖检可见接种鸡法氏囊水肿、色黄,有时可见出血。
脾脏有时可见轻度肿大,表团有灰色点状病变。健康鸡则正常。
2.4.2.2IBDV变异株接种结果z接种后不出现死亡,3dJ!IJ检可见法氏囊萎缩、质度硬,脾脏可见肿大
l倍~2倍。健康鸡则正常。
2.5IBD病毒的鉴定
2.5.1琼脂凝胶免疫扩散(AGID)试验
用已知的特异性的鸡传染性囊病标准阳性血清,用分离株的法氏囊匀浆制备待检抗原,同时制备正
常法氏囊