上皮性肿瘤标记上皮膜抗原（EMA）：广泛分布于各种正常上皮细胞膜及肿瘤中。癌胚抗原（CEA）：主要存在于胎儿消化道上皮，胰腺以及绝大部分内脏癌。前列腺特异性抗原（PSA）：甲胎蛋白（AFP）：甲状腺球蛋白（Tg）：第30页，共45页，星期日，2025年，2月5日软组织标记软组织：全身各处的纤维结缔组织，脂肪组织，肌肉组织，滑膜组织及血管淋巴组织。肌动蛋白（Actin）：分布于所有的肌型细胞中肌红蛋白（Myoglobin）：是骨骼肌肌浆中的一种可溶性蛋白，具有较高组织特异性。第31页，共45页，星期日，2025年，2月5日内皮细胞标记CD34：主要标记内皮细胞；亦可用于各种肿瘤间质中血管生成的研究。第八因子相关抗原（Factor-Ⅷ-relatedantigen,FⅧ-RAg）：血管瘤阳性表达程度强于血管肉瘤。CD34优于FⅧ-RAg。溶菌酶（Lysozyme）：为组织细胞及其肿瘤的标记物。抗胰糜蛋白酶（AAcT）：主要用于恶纤组的诊断。第32页，共45页，星期日，2025年，2月5日**关于免疫组化技术课件第1页，共45页，星期日，2025年，2月5日组织化学的基本概念：组织化学：组织水平，对组织内存在的各种物质进行定性、定量以及其局部的和移动的部位分析的方法免疫组织化学：基于抗原抗体反应酶组织化学第2页，共45页，星期日，2025年，2月5日疾病的病理学研究概括起来主要在基因和蛋白水平上进行的研究。免疫组织化学方法主要用于基因蛋白质水平表达的研究。蛋白表达=分布，定位，定量；蛋白表达与与肿瘤生物学行为及预后关系等第3页，共45页，星期日，2025年，2月5日材料：抗体：多克隆抗体：为针对多个抗原决定簇的抗体，为产生抗体的动物血清或免疫球蛋白。单克隆抗体：为一个B淋巴细胞分化增殖产生的抗体，可识别有限的抗原决定簇，特异性强。第4页，共45页，星期日，2025年，2月5日显示物：酶标反应：①碱性磷酸酶（Alkatinephasphotase,AP）AP与不同的底物（萘酚As-Mx、快蓝、快红）作用，可形成不同颜色的终产物。用新品红（Newfuchsine）显色，可形成不溶于有机溶剂的红色沉淀，不褪色。②辣根过氧化酶(Horseradiseperoaidase,)HRP：底物为DAB－四盐酸二氨基联苯胺，产生棕色沉淀，不溶于有机溶剂，不褪色。第5页，共45页，星期日，2025年，2月5日HRP第6页，共45页，星期日，2025年，2月5日APHE第7页，共45页，星期日，2025年，2月5日荧光标记：荧光素标记抗体异硫氰酸荧光素（Fluorescienisothioyarale,FITC）520－530nm四甲基异硫氰酸罗达明（Teramethylerhodamineisothiecyanata,TRITC）620nm四乙基罗达明（TeraethylerhodamineB200,RB200）590－600nm第8页，共45页，星期日，2025年，2月5日第9页，共45页，星期日，2025年，2月5日胶体金：指金的水溶胶（以微小粒子分散在水溶液中，免疫电镜观察第10页，共45页，星期日，2025年，2月5日主要方法：直接法：间接法：经过了第二抗体放大效应PAP法：以过氧化物酶和抗过氧化酶抗体形成复合物，通过第二抗体的桥接与第一抗体结合，然后以酶底物反应检出。第11页，共45页，星期日，2025年，2月5日第12页，共45页，星期日，2025年，2月5日ABC法：生物素（Biotin）和卵白素（Avidin）为具有高度亲合性的物质，一个卵白素分子可结合4个生物素。当生物素标上特定的标记物质后or与抗体结合后仍能与卵白素结合，因此，将抗体结合上生物素，然后与卵白素和带有特殊标记物的生物素的结合反应，而以适当方式显示。第13页，共45页，星期日，2025年，2月5日S-P法（LSAB）：采用生物素标记的第二抗体与链霉素生物素蛋白连接的过氧化物酶及基质素（底物）混合液来测定细胞和组织中的抗原。第14页，共45页，星期日，2025年，2月5日EnvisionⅠ法（二步法）：原理：第二抗体上标记有多聚