获得纯净培养物的关键是什么？二、无菌技术防止外来杂菌污染1.目的：2.方法：消毒与灭菌消毒与灭菌的概念和区别？第31页，共64页，星期日，2025年，2月5日耐高温需保持干燥的物品，160～170℃1～2小时接种环、接种针等金属用具70~75℃、30min80℃、15min100℃、5~6min消毒灭菌定义方法较为温和理化方法，杀死部分有害菌体（不包括芽孢、孢子）强烈的理化方法，杀死所有微生物（包括芽孢、孢子）煮沸消毒法巴氏消毒法化学药剂紫外线灼烧灭菌干热灭菌酒精、氯气、石炭酸等高压蒸汽灭菌培养基，100KPa、121℃、15～30min二.无菌技术：防止外来杂菌的污染2.消毒与灭菌：第32页，共64页，星期日，2025年，2月5日第33页，共64页，星期日，2025年，2月5日高压蒸气灭菌的原理是（）A．高压使细菌DNA变性B．高压使细菌蛋白质凝固变性C．高温烫死细菌D．高温使细菌DNA变性B第34页，共64页，星期日，2025年，2月5日关于灭菌和消毒的不正确的理解是A．消毒和灭菌实质上是相同的B．灭菌是指杀死环境中的一切微生物的细胞、芽孢和孢子C．接种环用烧灼的方法灭菌D．常用灭菌方法有加热法、过滤法、红外线法、化学药品法A第35页，共64页，星期日，2025年，2月5日1.无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外，还有什么目的？2.请你判断以下材料或用具是否需要消毒或灭菌。如果需要，请选择合适的方法。（1）培养细菌用的培养基与培养皿（2）玻棒、试管、烧瓶和吸管（3）实验操作者的双手答：无菌技术还能有效避免操作者自身被微生物感染。答：（1）、（2）需要灭菌；（3）需要消毒。旁栏思考第36页，共64页，星期日，2025年，2月5日2.无菌范围：实验操作空间消毒操作者的手、衣着消毒实验用具灭菌实验操作过程二.无菌技术：防止外来杂菌的污染1.消毒与灭菌：酒精灯旁操作超净工作台第37页，共64页，星期日，2025年，2月5日二、微生物实验室培养的基本操作程序1、器具的灭菌2、培养基的配制3、培养基的灭菌4、倒平板5、微生物接种6、恒温箱中培养7、菌种的保存第38页，共64页，星期日，2025年，2月5日第39页，共64页，星期日，2025年，2月5日涂布器接种环接种针第40页，共64页，星期日，2025年，2月5日第41页，共64页，星期日，2025年，2月5日1000ml牛肉膏蛋白胨培养基的配方H2O定容至1000mlNacl5g蛋白胨10g牛肉膏5g琼脂20.0g四.大肠杆菌的纯化培养：㈠制备牛肉膏蛋白胨固体培养基1.计算：培养基用量依配方计算各成分的用量2.称量：3.溶化：牛肉膏黏稠，用称量纸称取牛肉膏、蛋白胨易吸潮，要快、加盖牛肉膏、称量纸、少量水加热溶解→取纸→蛋白胨、NaCl→琼脂→补水定容4.调pH、分装、封口：5.灭菌：6.倒平板7.无菌检查：37℃培养24-48h培养基、培养皿分散成单个细胞,形成单个菌落第42页，共64页，星期日，2025年，2月5日倒平板约50℃防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基第43页，共64页，星期日，2025年，2月5日答：可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时，就可以进行倒平板了。2.为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？答：通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。问题讨论1.培养基灭菌后，需要冷却到50℃左右时，才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温度？第44页，共64页，星期日，2025年，2月5日3.平板冷凝后，为什么要将平板倒置？4.在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？答：平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后的培养基表面的湿度也比较高，将平板倒置，既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。答：空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生，因此最好不要用这个平板培养微生物。第45页，共64页，星期日，2025年，2月5日关于微生物的实验室培养(6)第1页，共64页，星期日，2025年