ICS67.160.10
X62TB
团体标准
DB64
T/NAIA×××-××××
T/NAIA026—2021
单链抗体真核表达质粒
琼脂糖凝胶电泳检测方法
(征求意见稿)
××××-××-××发布××××-××-××实施
宁夏化学分析测试协会发布
发布
单链抗体真核表达质粒
琼脂糖凝胶电泳检测方法
1范围
本标准规定了单链抗体真核表达质粒琼脂糖凝胶电泳检测方法。
本标准适用于单链抗体真核表达质粒原液及制剂中质粒琼脂糖凝胶电泳的检
测。
2规范性引用文件
下列文件对于本文件的引用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日
期的版本适用于本文件，凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修
改单）适用于本文件。
《分子生物学实验》（高等院校生物类专业系列教材，李钧敏主编，浙江大学
出版社出版）
《生物技术药物研究开发和质量控制》（第三版，王军志主编，科学出版社出
版）
《中华人民共和国兽药典》（2020年版一部，中国兽药典委员会编，中国农
业出版社出版）。
GB/T6682《分析实验室用水规格和试验方法》
3术语和定义
下列术语和定义适用于本文件。
3.1单链抗体
是由抗体重链可变区和轻链可变区通过15~20个氨基酸的短肽连接而成。
3.2真核表达
通过真核细胞的转录加工，系统的获得具有一定构象和生物活性的蛋白质。
3.3质粒
是存在于细菌染色体外的能独立复制并稳定遗传的小型双链DNA分子。
4.试剂和材料
4.1除非另有说明，分析时均使用符合国家标准的分析纯试剂。
4.2实验用水符合GB/T6682规定的一级水。
4.31×TAE缓冲液：用50×TAE缓冲液稀释50倍。
4.46×加样缓冲液：0.25%溴酚蓝，0.25%二甲苯青FF,30%甘油，溶于水中，
4℃贮存。
4.510mg/mL溴化乙锭溶液：1g溴化乙锭溶于100mL水中，分装至小管中用箔
纸包裹或转移至棕色瓶中，室温下避光保存。
4.6琼脂糖（电泳级）。
4.7DNA分子大小标准参照物（5000Marker）。
5.仪器和设备
5.1电子天平(千分之一)
5.2微波炉
5.310μL移液器
5.4电泳仪
5.5水平电泳槽
6.检测步骤
6.1制备1%琼脂糖胶液：称取1g琼脂糖置于250mL三角烧瓶中，加入100mL
1×TAE缓冲液。
6.2溶解:用微波炉加热，使琼脂糖充分溶解。一般为中火加热2min,取出混
匀，再加热2min，必须保证琼脂糖完全溶解。可用肉眼对着光线观察，若晃动
过程中还观察到小颗粒，则未溶解完全。
6.3加入溴化乙锭：戴上一次性手套，加入溴化乙锭溶液至终浓度为0.5μ
g/mL(100mL中加入5μL10mg/mL溴化乙锭溶液），混匀，室温冷却至50℃左右。
6.4灌胶：根据样品的多少，选择合适的制胶板。将洗净、干燥后的制胶板模
型架好，缓慢地将琼脂糖胶液注入带有“梳子”的胶床中（避免产生气泡），至
凝胶完全凝固，约需20～60min。配制凝胶所用的电泳缓冲液应与电泳槽中的相
一致，溶解的凝胶冷