第十九章

生物素-亲合素系统及其在免疫检测技术中的应用*熟悉：生物素-亲和素系统特点及应用。了解：其他。*生物素——亲合素系统

（biotin-avidinsystem,BAS）生物素与亲合素是一对具有高度亲合力的分子，其结合迅速、专一、稳定。既能偶联抗原、抗体等生物活性物质，又能被酶、荧光素、胶体金等示踪物标记，具有桥联抗原抗体系统和示踪物指示系统的作用。*维生素H（维生素B7）动、植物组织中广泛分布,卵黄和肝含量高MW244.31kD.I环为咪唑酮环，可与亲合素结合Ⅱ环为噻吩环，环上戊酸侧链的未端羧基是结合生物大分子的唯一结构I咪唑酮环Ⅱ噻吩环羧基第一节生物素的特性一、生物素理化性质熟悉*生物素侧链的末端羧基经化学修饰后制成带各种活性基团的衍生物－活化生物素(生物素化衍生物)二、活化生物素了解*活化生物素易与抗原、抗体偶联形成生物素化标记物标记蛋白质氨基的活化生物素标记蛋白质醛基的活化生物素标记蛋白质巯基的活化生物素标记核酸的活化生物素生物素活化了解*第二节

亲合素和链霉亲合素的特性亲合素和链霉亲合素是生物素的天然结合物，可与几乎所有用于标记的物质结合。*结构四亚基糖蛋白四肽链蛋白无糖基PI10.56结合位色氨酸色氨酸生物素44活性13～1518亲合素（A）链霉亲合素(SA)熟悉*1.高特异性2.高敏感性3.稳定性强4.适用性广、实用性强成本低第三节生物素与亲合素结合反应的特点熟悉*第四节生物素-亲合素系统

在免疫检测技术中的应用*BAS在ELISA中的应用生物素-亲合素系统在均相酶免疫定一、固相载体的包被优点：增加抗原（抗体）包被数量，减少空间位阻，提高利用率*1.生物素-链霉亲合素-生物素化抗体（或抗原）包被法了解*2.链霉亲合素-生物素化抗体（或抗原）包被法*（一）生物素-亲合素-生物素模式1.生物素-亲合素-生物素法（BAB法）2.亲合素-生物素-过氧化酶复合物法（ABC法）二、检测系统的信号放大熟悉*BAB法：Ag+B·AbAg-Ab·BAAg-Ab·B-AB·EAg-Ab·B-A-B·E特点：以游离A分别连接B-Ab和B-E1.生物素-亲合素-生物素法熟悉*原理*ELISA-BAB法：

桥连亲和素-标记生物素法*ABC法⑴A+B·EA-B·EABC⑵Ag+B·AbAg-Ab·BABCAg-Ab·B-ABC特点:将BAB法中的A先与B-E结合，制备成复合物ABC*BA法：Ag+B·AbAg-Ab·BA·EAg-Ab·B-A-B·E特点：以A-E/SA-E代替BAB法中的A省却了加B-E的步骤。（二）生物素-亲合素模式了解*1.每个亲和素能结合多少个分子的生物素()

A.1B.2C.3D.4E.52.生物素分子中与亲和素结合的主要部位是()A.噻吩环B.咪唑酮环C.苯环D.羰基E.-NH-3.亲和素分子中结合生物素分子的基团是()

A.戊酸侧链B.末端羧基C.缬氨酸残基D.色氨酸残基E.赖氨酸残基DBD*4.在生物素分子中可连接生物大分子(Ag/Ab)的部位是()

A.戊酸侧链B.咪唑铜环C.噻吩环D.侧链末端羧基E.苯环5.1mg亲和素的活性单位是()

A.3-5UB.5-8UC.13-15U

D.15-18UE.20-30UDC*6.1mg链霉亲和素的活性单位是()

A.5UB.8UC.15UD.18UE.20U7.生物素-亲和素系统中ABC的含义是()A.生物素-抗体B.生物素-亲和素抗体复合物C.生物素-酶复合物D.亲和素-酶复合物E.亲和素-生物素化酶复合物8.不属于BAS特点的是（）A.特异型好B.敏感性高