第6章蛋白质分离技术-;Chapter7
蛋白质的分离、纯化和表征;一、蛋白质的酸碱性质
两性电解质
可解离基团：?-NH3+
?-COO-
侧链上的功能基团见（书P290）
氨基酸有的化学性质蛋白质就有。
PI=正负电荷相等，净电荷为零时的pH.
（见书P291表7-2）
;二、蛋白质分子大小与形状
从6000—1000000Dalton(道尔顿）
为纪念原子学说（1803年）创始人JohnDalton.
Dalton=12C原子绝对质量1/12=1.66033?10-27
（一）最低分子量测定
（二）滲透压（Osmoticpressure）测分子量
在理想的溶液中Osmoticpressure与溶质浓度的关系为；
?=——
C=溶质浓度R=气体常数（0.082)
T=绝对温度?=渗透压
;
M=——
;
M=
;(五）凝胶过滤法（gelfiltration);;(五）凝胶过滤法
（gelfiltration);(六）SDS蛋白质测分子量（sodiumdodecylsulfatepolyacylamidegelelectrophoresis);;;;;;;;三、蛋白质的胶体性质与蛋白质沉淀;（二）蛋白质的沉淀
破坏了上述胶体溶液的稳定条件就会沉淀。
方法：1.盐析法(saltout)(NH2)4SO4,Na2SO4,NaCl
2.有机溶剂甲醇，乙醇，丙酮
3。重金属盐pHpI时P带负电荷与Hg2+,Pb2+,Cu2+,Ag+形成不溶性盐
4.生物碱pHpI时，P+—生物碱沉淀
5.加热变性沉淀法
少量盐加速蛋白质加热凝固。
;四、蛋白质分离提纯的一般原则（separationandpurification)
1.Pretrestment（匀浆，研磨，超声波）
2.Roughfractionation（盐析，等电点，有机溶剂）
3.Finefractionation（层析）
;五、蛋白质混合物的分离方法;（二）利用溶解度差别分离蛋白质;;;;第6章蛋白质分离技术-;;2.离子交换层析
;2.离子交换层析
介质：CMC
CM-SephadexG-50
DEAE-纤维素
DEAE-SephadexA-25
A-50
QAE-SephadexA-50;(四）蛋白质的选择吸附分离
（adsorptionchromatography)
介质：活性碳硅胶氧化铝磷酸钙
硅藻土
（五）亲和层析法
抗原—抗体酶—辅酶酶—抑制剂;第6章蛋白质分离技术-;;六、蛋白质含量测定与纯度鉴定;谢谢聆听！