生物活性测定：测活性。灵敏性高,特异性低蛋白水平ELISA免疫学测定化学发光酶免疫试验（含量）流式细胞术酶联免疫斑点试验第二节临床常用的测定方法掌握*一、酶联免疫吸附试验（一）基本方法1.直接法---双抗体夹心法（测CK最常用方法）2.间接法3.抗原竞争法熟悉*敏感性偏低不能区分细胞因子的生物学活性（二）方法学评价特异、简便成本低、易于推广和标准化等优点可同时检测大量标本且试验废弃物便于处理细胞因子测定的首选方法缺点优点了解*二、化学发光酶免疫试验是以发光剂作为酶免疫测定的底物，通过发光反应增强测定的灵敏度。（一）基本方法双抗体夹心法（二）方法学评价特异性好、灵敏度高、线性范围宽、试剂稳定、可自动化检测了解*三、流式细胞术（flowcytometry,FCM)分离和培养待检细胞细胞破膜与固定封闭非特异性结合位点染色与分析基本方法了解*方法学评价优点：特异、高效、灵敏.应用:对单个细胞水平CK或AM检测；检测细胞内CK；膜上AM、CK受体同一细胞内两种以上细胞因子表达熟悉*四、酶联免疫斑点试验(ELISPOT)包被有待测细胞因子抗体的微孔板分泌相应细胞因子的待测细胞有或无刺激物培养细胞因子被板上的特异性抗体捕获后续的反应如同ELISA一个斑点代表一个细胞因子分泌细胞，斑点的颜色深浅程度与细胞分泌的细胞因子量相关基本原理+了解**方法学评价比常规ELISA法的灵敏度提高200倍应用：检测分泌特定细胞因子的细胞熟悉*五、免疫学测定方法学评价优点：特异性高操作简便、快速，无需依赖细胞株影响因素较少且易控制，重复性好，方法容易标准化。缺点：所测定含量，与其生物活性不一定呈正比结果与所用的抗体来源及亲和力有很大的关系敏感性相对较低标本中可溶性受体，会影响特异性抗体对细胞因子结合熟悉*第三节细胞因子与黏附分子测定的临床应用1.特定疾病的辅助诊断2.机体免疫状态的评估3.临床疾病治疗效果的监测和指导用药4.疾病预防的应用熟悉*一、临床应用原则方法选择和结果判断作出综合考虑:异质性功能交叉性和多样性来源的复杂性组织细胞的非特异性细胞因子和粘附分子*全身免疫或炎症状态——血浆、血清炎症局部细胞因子的水平——局部分泌液细胞分泌细胞因子的特性——外周单个核细胞细胞表面细胞因子受体或黏附分子定位检测疾病疗效观察和预后判断1.标本的适当选取*敏感性高-------特异性低，废弃物难处理活性测定-------不能精确蛋白定量基因分析-------操作繁琐，有助于疾病分析多种方法—综合分析—正确评价2.方法的联合应用*意义：细胞因子具有网络状调节的特点级联效应或相互抑制作用的网络系统有助于提供有效的疾病诊断和机体免疫状态信息举例：免疫细胞分泌：IL-1、IL-2、IFN-γ和GM-CSFTh1/Th2细胞平衡状态：IL-2、IL-4、IL-10和IFN-γ3.细胞因子的联合检测*二、特定疾病的辅助诊断（一）细胞因子与疾病1.细胞因子风暴—IL-1、IL-2、IL-6、IFN-γ等引发全身炎症反应综合征2.变态反应性疾病—哮喘IL-4促进IgE合成3.自身免疫病—类风湿性关节炎（TNF-α、IL-1、IL-6、IL-8、MCP-1）*（一）细胞因子与疾病4.免疫缺陷病—IL-2Rγ基因缺陷（重症联合免疫缺陷病）；IL-6（浆细胞瘤、膀胱癌）5.器官移植排斥反应—TNF-α、IL-1、IL-2、IL-6、IFN-γ水平升高6.恶性肿瘤—检测IL-2、IL-6、IFN-γ水平用于疗效的评估*（二）黏附分子与疾病1.动脉粥样硬化——ICAM、P-选择素2.肾脏疾病——ICAM3.肝脏疾病---VCAM-1、ICAM-1、IL-14.自身免疫病----SLE（E-选择素、ICAM-1）