第三章高效液相色谱法;第六节高效毛细管电泳
一、高效毛细管电泳仪器;第3章高效液相色谱法;第3章高效液相色谱法;二、高效毛细管电泳基本原理
在电解质溶液中，位于电场中的带电离子在电场力的作用下，以不同的速度向其所带电荷相反的电极方向迁移的现象，称之为电泳。由于不同离子所带电荷及性质的不同，迁移速率不同可实现分离。
经典电泳分离法的不足：所用
分离柱的柱径大，柱较短，分
离效率不高（远低于HPLC），
温度影响大。
高效毛细管电泳在技术上采取
了两项重要改进。;高效毛细管电泳在技术上采取了两项重要改进：
一是采用了0.05mm内径的毛细管；
二是采用了高达数千伏的电压。
★毛细管的采用使产生的热量能够较快散发，大大减小了温度效应，使电场电压可以很高。
★电压升高，电场推动力大，又可进一步使柱径变小，柱长增加，
★高效毛细管电泳的柱效远高于高效液相色谱，理论塔板数高达几十万块/米，特殊柱子可以达到数百万。;电泳现象与电渗流现象
电泳现象：带电离子在电场作用下的迁移，速度v电泳
电渗流现象：玻璃表面存在硅羟基,pH3时,形成双电层，在高电场的作用下引起柱中的溶液整体向负极移动，速度v电渗流
;分离过程：
电场作用下,柱中出现：电泳现象和电渗流现象
带电粒子的迁移速度=电泳和电渗流两种速度的矢量和
正离子：两种效应的运动方向一致,在负极最先流出
中性粒子无电泳现象,受电渗流影响,在阳离子后流出
阴离子：两种效应的运动方向相反，v电渗流v电泳时,阴离子在负极最后流出,在这种情况下,不但可以按类分离,除中性粒子外,同种类离子由于受到的电场力大小不一样也同时被相互分离。;分离类型
1.毛细管区带电泳（CZE）
最普遍、最基本的一种分离模式。;3.毛细管胶束电动色谱（MECC）
在缓冲溶液中加入离子型表面活性剂，形成一疏水内核、外部带负电的胶束。在电场力的作用下，胶束在柱中移动。由于电泳流和电渗流的方向相反，且v电渗流v电泳，则带负电的胶束以较慢的速度向负极方向移动，中性试样分子在胶束相和溶液（水相）两相间分配，疏水性??的组分与胶束结合的较牢，流出时间长。
可用来分离中性物质，扩展了高效毛细管电泳的应用范围。;第3章高效液相色谱法;三、仪器装置;四、影响柱效的因素及改进方法;五、主要特点和应用;第七节纸层析和薄层层析法
一、纸层析和薄层层析分离过程
纸层析和薄层层析也属于色谱分析法。但与其它色谱方法不同的是在分离过程中一般不使用动力源。
纸层析和薄层层析流动相的移动是依靠毛细作用。
将试样点在色谱滤纸或层析板的一端，并将该端浸在作为流动相的溶剂（常称之为展开剂）中，随着溶剂向上的移动，经过试样点时，带动试样向上运动。;比移值;第3章高效液相色谱法;二、操作技术;1.展开剂
展开剂：由一种或多种溶剂按一定比例组成。
如用纸层析分离氨基酸时，常用的展开剂组成和配比为：正丁醇：乙酸：水=4：1：1;2.点样
点样:用微量注射器或玻璃毛细管吸取一定量试样点在原点上。试样点的直径一般应小于5mm。可并排点多个试样同时展开。;3.显色检测
有些组份在紫外光照射下产生荧光，可在紫外灯下用铅笔将组份斑点描绘出来。
常用的显色方法:喷洒显色剂、碘蒸气熏或氨水熏等。;三、特点及应用
优点：
平板色谱简单、方便、及操作费用低；
可以在一块层析板上同时展开多个试样及将多条滤纸同时展开；
采用方形薄层板还可以方便的进行二维展开，即按一般方法展开后，改变方向和展开剂再次展开，进一步改善分离效果；
试样一般不需要经过预处理即可分离。;缺点:
分离效率较低，不适用挥发性试样分离。
定性定量不便。
应用：
平板色谱法在染料、农药、医药、有机酸碱类化合物、糖类化合物、氨基酸、蛋白质及中草药中有效成分的分离分析中经常被使用；
可以用于无机离子的分离；
作为高效液相色谱的一种预试方法。;谢谢聆听！