H.三糖铁（TSI）琼脂试验试验方法：以接种针挑取待试菌可疑菌落或纯培养物，穿刺接种并涂布于斜面，置36±1℃培养18~24h，观察结果。培养基：乳糖：蔗糖：葡萄糖=10：10：1；加有酚红本试验可同时观察糖发酵产酸或产酸产气（变黄）；产生硫化氢（变黑）。只能利用葡萄糖的细菌，葡萄糖被分解产酸可使斜面先变黄，但因量少，生成的少量酸，因接触空气而氧化，加之细菌利用培养基中含氮物质，生成碱性产物，故使斜面后来又变红，底部由于是在厌氧状态下，酸类不被氧化，所以仍保持黄色。第85页，共153页，星期日，2025年，2月5日第86页，共153页，星期日，2025年，2月5日I.硫化氢-靛基质-动力（SIM）琼脂试验试验方法：以接种针穿刺接种约1/2深度，置36±1℃培养18~24h，观察结果。培养物呈现黑色为硫化氢阳性，混浊或沿穿刺线向外生长为有动力，然后加吲哚试剂数滴于培养表面，静置10min，若试剂呈红色为吲哚阳性。培养基未接种的下部，可作为对照。本试验用于肠杆菌科细菌初步生化筛选，与三糖铁琼脂等联合使用可显著提高筛选功效。第87页，共153页，星期日，2025年，2月5日2.1.4微生物酶的测定a.氧化酶（细胞色素氧化酶）氧化酶亦即细胞色素氧化酶，为细胞色素呼吸酶系统的终末呼吸酶，氧化酶先使细胞色素C氧化，然后此氧化型细胞色素C再使对苯二胺氧化，产生颜色反应。试验方法：在琼脂斜面培养物上或血琼脂平板菌落上滴加试剂1~2滴，阳性者Kovacs氏试剂（盐酸二甲基对苯二胺）呈粉红色~深紫色；阴性者无颜色改变。应在数分钟内判定试验结果。第88页，共153页，星期日，2025年，2月5日b.过氧化氢酶的测定过氧化氢酶又称接触酶，能催化过氧化氢分解成水和氧。H2O2→H2O+O2枯草芽孢杆菌+产氮芽孢杆菌-试验方法：取一干净的载波片，在上面滴1滴3－10％的H2O2，挑取1环培养18－24h的菌苔，在H2O2溶液中涂抹，若有气泡（氧气）出现，则为过氧化氢酶阳性，无气泡者为阴性。也可将过氧化氢溶液直接加入斜面上，观察气泡的产生。第89页，共153页，星期日，2025年，2月5日第90页，共153页，星期日，2025年，2月5日c.尿素酶（Urease，脲酶）试验有些细菌能产生尿素酶，将尿素分解、产生2个分子的氨，使培养基变为碱性，酚红呈粉红色。尿素酶不是诱导酶，因为不论底物尿素是否存在，细菌均能合成此酶。其活性最适pH为7.0。酚红：黄色→红色（+普通变形杆菌）黄色（-大肠杆菌）试验方法：挑取18~24h待试菌培养物大量接种于液体培养基管中，摇均，于36±1℃培养，观察结果。或涂布并穿刺接种于琼脂斜面，不要到达底部，留底部作变色对照。培养24h左右，观察结果，如阴性应继续培养至4天，作最终判定，变为粉红色为阳性。第91页，共153页，星期日，2025年，2月5日UreaseTest尿素酶试验：urea尿素ammonia氨第92页，共153页，星期日，2025年，2月5日D.β-半乳糖苷酶（ONPG）的测定本试验应用于肠肝菌科的鉴定由于β-半乳糖苷酶催化水解β-半乳糖苷化合物中的β-D-半乳糖苷键，ONPG（邻硝基苯酚-β-D-吡喃半乳糖苷）是一种常用的色素原基质，在β-半乳糖苷酶存在下，此无色的ONPG复合物会分解成半乳糖和邻硝基酚（ONP），邻硝基酚是黄色的。测定步骤：挑取1大环培养18h的菌苔入约0.25mL的生理盐水中制成菌悬液，每管加1滴甲苯，摇匀（有助于酶的释放），于37℃放置5分钟。在菌悬液中加入0.25mL的0.75mol/LONPG，测定管置于37℃水浴培养。经30分、1、2、3、……24h进行观察，如有黄色者则为阳性。第93页，共153页，星期日，2025年，2月5日第94页，共153页，星期日，2025年，2月5日2.2简捷分类（分类到属）在实际生产中，常常要进行的菌种判别的要求并不高，而只希望快速而简单，主要进行下列四项实验，就可判断常见常用细菌的属：①显微镜观察，球菌还是杆菌②革兰氏染色，阳性还是阴性③产芽孢试验④VP试验简捷分类表第95页，共153页，星期日，2025年，2月5日细菌
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