*诱变剂选择诱变剂量选择平板筛选技术第31页，共80页，星期日，2025年，2月5日*1出发菌株的选择出发菌株：用来进行育种处理的起始菌株◆出发菌株应具备
①对诱变剂的敏感性高；
②具有特定生产性状的能力或潜力；◆出发菌株的来源
①自然界直接分离到的野生型菌株：
②历经生产考验的菌株：
③已历经多次育种处理的菌株：第32页，共80页，星期日，2025年，2月5日*制备单细胞或单孢子悬液
要求①菌体处于对数生长期，孢子初萌发
②细胞分散且为单细胞，
方法①玻璃珠打散10-15min;
②加吐温80或Tritonx-100
③用无菌脱脂棉过滤。
制备：物理诱变剂——生理盐水，磷酸缓冲液
化学诱变剂——特定的缓冲液
浓度：细菌、放线菌＞108个/ml
霉菌、酵母菌＞106个/ml第33页，共80页，星期日，2025年，2月5日*2诱变剂诱变剂的选择诱变剂作用的普遍性：选择那些在其它菌种选育中诱变效果好的诱变剂。如：UV，亚硝基胍（NTG），快中子等。诱变剂的特异性：经验性：如，四环素族抗生素用亚硝酸、羟胺，青霉素用氮芥、乙烯亚胺、亚硝基胍．第34页，共80页，星期日，2025年，2月5日*菌株的差异：（即使是同一菌）A：遗传性不稳定的菌株---用缓和诱变剂B：遗传性稳定的菌株---首用强，后用缓。考虑诱变机制：UV嘧啶，亚硝酸嘌呤，因此复合作用为好第35页，共80页，星期日，2025年，2月5日*诱变剂剂量的选择用90-99%杀菌剂量用50—85%的杀菌剂量，此时正突变率高，特别是出发菌株已是高产菌株。第36页，共80页，星期日，2025年，2月5日*第37页，共80页，星期日，2025年，2月5日*诱变剂的处理方法诱变剂使用方式：单一处理，复合处理：诱变处理条件：温度（生长温度）PH（缓冲剂），处理时间诱变作用的终止：用解毒剂（终止缓冲液）、用水稀释第38页，共80页，星期日，2025年，2月5日*第39页，共80页，星期日，2025年，2月5日*诱变剂使用方法举例------紫外线第40页，共80页，星期日，2025年，2月5日*亚硝酸---缓冲液终止液第41页，共80页，星期日，2025年，2月5日*甲基磺酸乙酯（EMS）------母液，工作液，终止液（解毒液）第42页，共80页，星期日，2025年，2月5日*复合诱变处理（示例）-------固体诱变第43页，共80页，星期日，2025年，2月5日*3突变株的筛选中间培养基因型+环境表型目的：克服表型迟延，使突变充分表达分离性迟延现象生理性迟延现象第44页，共80页，星期日，2025年，2月5日*合适的筛选方法：平皿快速检测法（初筛）变色圈法透明圈法生长圈法抑菌圈法梯度平板法摇瓶培养法（复筛）第45页，共80页，星期日，2025年，2月5日*第46页，共80页，星期日，2025年，2月5日*显色圈第47页，共80页，星期日，2025年，2月5日*透明圈第48页，共80页，星期日，2025年，2月5日*抑菌圈第49页，共80页，星期日，2025年，2月5日*抑菌圈第50页，共80页，星期日，2025年，2月5日*生长圈第51页，共80页，星期日，2025年，2月5日*第一轮：一个出发菌株→→→选出200个菌株→→→选出50株→→→选出5株诱变处理初筛（每株1瓶）复筛（每株3-5瓶）第二轮：5个出发菌株→→→→→→选出50株→→→选出5株40株40株40株40株40株诱变处理初筛复筛（每株1瓶）（每株3-5瓶）复筛第52页，共80页，星期日，2025年，2月5日*三类常见突变株的筛选产量突变株筛选抗药性突变株的筛选（梯度平板法）营养缺陷型(auxotroph)的筛选