细胞实验操作流程与规范
演讲人：
2025-06-03
目录
CONTENTS
01
实验前期准备
02
基础操作步骤
03
核心仪器使用规范
04
实验结果分析体系
05
实验质量控制
06
安全与伦理要求
01
实验前期准备
细胞种类与培养基选择
根据实验目的选择合适的细胞系或原代细胞，如肿瘤细胞系、干细胞系等。
细胞种类
培养基选择
特殊处理
根据细胞种类选择适宜的培养基，如基础培养基、完全培养基、无血清培养基等，同时考虑培养基的pH值、渗透压、营养成分等。
针对某些特定细胞，需进行特殊处理，如表面包被、生长因子添加等。
实验设备灭菌标准
实验室常规设备如培养箱、超净工作台、离心机、显微镜等需进行定期灭菌。
常规设备
采用高温高压蒸汽灭菌、化学浸泡、紫外线照射等方法进行灭菌，确保设备无菌。
灭菌方法
通过无菌试验、培养验证等方法，确保灭菌效果达到实验要求。
灭菌效果验证
试剂配制与质控
试剂配制
试剂保存
试剂质控
按照实验要求，准确配制所需试剂，如细胞培养液、PBS缓冲液、胰蛋白酶等，注意浓度和pH值的调整。
对配制好的试剂进行质量控制，包括无菌试验、毒性试验等，确保试剂对细胞无害。
配制好的试剂需放置于合适的条件下保存，如4℃冰箱或-20℃冷冻保存，避免试剂变质或污染。
02
基础操作步骤
准备工作
准备好培养基、胰蛋白酶、培养皿、离心管等实验器材。
细胞处理
将细胞从培养瓶中取出，用胰蛋白酶消化并吹打成单个细胞悬液。
接种培养
将细胞悬液按照一定比例接种到新的培养皿中，添加适量的培养基。
培养观察
将培养皿放入培养箱中，保持适宜的温度、湿度和气体环境，定期观察细胞生长状态。
细胞传代培养流程
细胞冻存与复苏技术
01
细胞冻存
将细胞悬液转移至冻存管中，加入适量的冻存液，控制降温速度，最终放入液氮罐中长期保存。
02
细胞复苏
从液氮罐中取出细胞冻存管，迅速放入37℃水浴中解冻，然后将细胞悬液转移至培养皿中，加入适量的培养基，放入培养箱中培养。
细胞转染操作要点
细胞准备
转染剂准备
转染操作
培养观察
选择生长状态良好的细胞进行转染，并在转染前进行细胞计数和铺板。
根据转染试剂的说明书，将转染试剂与DNA或RNA等转染物质混合，制备好转染复合物。
将转染复合物均匀滴加到细胞培养皿中，轻轻摇晃培养皿，使转染复合物均匀分布。
将培养皿放入培养箱中，保持适宜的温度、湿度和气体环境，定期观察细胞转染效果。
03
核心仪器使用规范
生物安全柜操作流程
准备工作
实验前需将生物安全柜内的台面、内壁及操作时用到的器材和试剂擦拭干净，并开启紫外灯进行杀菌。
样本处理
在生物安全柜内进行操作时，需佩戴手套和口罩，避免样本受到污染，同时要注意不同样本之间的交叉污染。
仪器运行
生物安全柜的风机应始终保持运转状态，以确保柜内空气流通和负压状态。实验过程中要随时观察仪器运行状态，如有异常应及时处理。
实验后处理
实验结束后，需将实验废弃物放入指定的容器中，并关闭生物安全柜的电源和门。对于需要消毒的物品，应按照相关程序进行处理。
倒置显微镜观察方法
样品制备
将待观察的样品放置在载玻片上，滴加适量的盖玻片，避免产生气泡。对于需要染色的样品，应按照染色程序进行操作。
01
显微镜调整
打开倒置显微镜的电源，调节光源亮度和焦距，使物像清晰可见。根据样品的特点，选择合适的物镜和目镜进行观察。
02
观察记录
在观察过程中，应及时记录样品的形态、结构、颜色等特征，并根据实验要求进行测量和拍照。同时要注意保持显微镜的清洁和干燥，避免镜头受到污染。
03
显微镜维护
使用完毕后，需及时清理显微镜的载物台、镜头等部件，并妥善保存。定期对显微镜进行维护和保养，确保其性能稳定可靠。
04
CO2培养箱参数设置
温度控制
根据实验要求，设置合适的温度，一般维持在37℃左右。同时需设置温度波动范围，避免温度过高或过低对细胞生长造成影响。
气体环境
CO2培养箱内需保持一定的CO2浓度，一般设定在5%左右。同时要注意气体的纯度和湿度，避免对细胞产生不良影响。
湿度控制
细胞在培养过程中需要适宜的湿度环境，一般保持在95%左右。湿度过高或过低都会影响细胞的生长和分裂。
清洁与维护
定期对CO2培养箱进行清洁和消毒，保持其内部环境的洁净和稳定。同时要注意检查培养箱的门是否密封良好，防止外界污染。
04
实验结果分析体系
细胞活性检测方法
检测细胞存活和增殖，通过颜色变化来测定细胞的活性。
MTT法
通过细胞表面标记物或荧光染料来检测细胞活性。
流式细胞术
通过细胞在培养皿中形成克隆的能力来评估细胞的活性。
细胞克隆形成实验
荧光标记数据分析
荧光原位杂交（FISH）分析
利用荧光标记的探针在细胞内杂交来检测特定的DNA或RNA序列。
03
通过荧光共振能量转移现象来