酶催化反应应用脂肪酶肽合成青霉素G前体肽合成酯合成醇与有机酸合成酯类转酯各种酯类生产聚合二酯的选择性聚合酰基化甘醇的酰基化蛋白酶肽合成合成多肽酰基化糖类酰基化羟基化酶氧化甾体转化过氧化物酶聚合酚类、胺类化合物的聚合多酚氧化酶氧化芳香化合物的羟基化胆固醇氧化酶氧化胆固醇测定醇脱氢酶酯化有机硅醇的酯化*(1)环氧丙醇衍生物的拆分:2,3-环氧丙醇单一对映体的衍生物是一种多功能手性中间体。它可以用于合成B一受体阻断剂、HIV蛋白酶抑制剂、抗病毒药物等多种手性药物。其消旋体可以在有机介质体系中用酶法进行拆分,获得单一对映体。例如,用猪胰脂肪酶(PPL)等在有机介质体系中对2,3-环氧丙醇丁酸酯进行拆分,得到单一的对映体。*(2)芳基丙酸衍生物的拆分:2-芳基丙酸(CH,CHArC0OH)是手性化合物,其单一对映体衍生物是多种治疗关节炎、风湿病的消炎镇痛药物,如布洛芬、酮基布洛芬、萘普生等的活性成分。用脂肪酶在有机介质体系中进行消旋体的拆分,可以得到S-构型的活性成分。(3)苯甘氨酸甲酯的拆分:苯甘氨酸的单一对映体及其衍生物是半合成p-内酰胺类抗生素,如氨苄青霉素、头孢氨苄、头孢拉定等的重要侧链。脂肪酶在有机介质中通过不对称氨解反应,可以拆分得到单一对映体。*七、人工模拟酶模拟酶:根据酶的作用原理,人为制造的具有酶性质的催化剂。利用有机化学合成的方法合成了一些比酶结构简单得多的具有催化功能的蛋白或非蛋白质分子。特点:高效,高适应性,结构简单。作用机制:稳定过渡态理论,酶先与底物结合,进而选择性稳定某一特定反应的过渡态,降低反应活化能,从而加快反应速度.*环糊精是一种优良的模拟酶环糊精外侧亲水,内侧疏水,形成空穴,可以从水溶液中抽提适当形状的有机小分子,并束缚入空穴通过对环糊精修饰,可使空穴适合不同的底物环糊精催化反应时,先结合再反应.*环糊精模拟的胰凝乳蛋白酶与天然酶催化效率几乎相同胰凝乳蛋白酶活性部位由Ser195,His57,Asp102组成,模拟酶在催化侧链上接上羟基,咪唑基,羧基,发挥催化作用环糊精束缚底物,活性基团发挥催化作用,环糊精的稳定性强于蛋白质成分的天然酶人工合成的冠醚,穴醚,环芳烃也用来构建酶模型*胶束模拟酶胶束在水溶液中提供疏水微环境,可对底物束缚将催化基团如咪唑,巯基,羟基和辅酶共价或非共价连接或吸附在胶束上,可提供“活性部位”单分子胶束酶模型*分子印迹酶通过分子印迹产生类似酶活性中心的空腔.在结合部位的空腔诱导产生催化基团,并与底物定向排列.分子印迹同天然酶一样,遵循米式动力学*生物印迹酶以天然的生物材料如蛋白质和糖类为骨架,在其上进行分子印迹而产生对印迹分子具有特异性识别空腔的过程。已成功模拟酯水解酶等以蛋白质为基础制备生物印迹酶过程:1.蛋白变性,扰乱起始构象。2.加入印迹分子,使之与部分变性的蛋白结合3.待结合后,用交联剂交联印迹的蛋白质。4.透析除去印迹分子**①将待诱变靶基因克隆到质粒上,分装到两个反应管中;②每一个反应管中加入两种特定的引物,其中引物1和3均含有错配核苷酸,但两个引物分别与质粒DNA的不同链不完全互补,引物2和4均不含有错配核苷酸,二者分别与质粒DNA的引物1和2杂交链的互补链完全互补;③进行PCR扩增获得含有突变碱基的线型质粒DNA;④将两个反应管中的线型质粒DNA混合,再经过变性和复性,一个反应管中的一条链和另一个反映管中的互补链杂交,通过两个粘性末端形成带有缺口的环状DNA分子;⑤转化入大肠杆菌,环状DNA分子的缺口可被大肠杆菌修复。如果同一反应管中的两个互补链又互相杂交,则继续形成线状DNA分子,在大肠杆菌中不稳定,易被降解。该方法把特异突变点导入克隆基因,无需把基因插入M13中,即可在大肠杆菌中进行表达。*淋巴细胞白血病患者缺乏天冬酰胺合成酶,能合成天冬酰胺2.抗体酶的制备原则稳定过渡态法*抗体结合部位修饰法用可裂解亲和标记试剂将催化基团引入到抗体结合部位的示意*3.抗体酶的制备方法(1)诱导法用设计好的半抗原(过渡态类似物)通过间隔链与载体蛋白(例如