影响因素蛋白质盐析pH变化温度变化等电点附近有极小值随温度升高减小，热促失水膜第30页，共48页，星期日，2025年，2月5日lgS第31页，共48页，星期日，2025年，2月5日第32页，共48页，星期日，2025年，2月5日蛋白质盐析盐析注意事项：(1)稳定pH用磷酸缓冲液（2）硫酸铵加入后体积变大（3）选择饱和度（4）分步盐析（5）初始蛋白浓度第33页，共48页，星期日，2025年，2月5日㏒S=β-ＫsＩS—蛋白质的溶解度，g/L;I－离子强度，I=1/2∑mizi2mi—离子i的摩尔浓度；Zi—所带电荷β—常数，图中截距Ks—盐析常数，图中直线斜率Cohn经验式
蛋白质溶解度与盐浓度的关系第34页，共48页，星期日，2025年，2月5日第1页，共48页，星期日，2025年，2月5日0概述固液分离的常用手段分类：离心沉降离心过滤超离心第2页，共48页，星期日，2025年，2月5日1离心沉降原理球形粒子沉降在离心力场中第3页，共48页，星期日，2025年，2月5日1离心沉降原理Ｆ３０００常速离心机Ｆ＝３０００-５００００中速离心机Ｆ≥５００００高速离心第4页，共48页，星期日，2025年，2月5日离心机的种类与用途按速度和离心力：1、常速离心机最大转速8000rpm(r/min),相对离心力(RCF)104g以下,用于细胞、菌体和培养基残渣等分离；2、高速（冷冻）离心机1×104-2.5×104rpm，相对离心力104~105g,用于细胞碎片、较大细胞器、大分子沉淀物等分离；3、超速离心机转速2.5-8×104rpm，相对离心力5*105g；用于DNA、RNA蛋白质、细胞器、病毒分离纯化；检测纯度；沉降系数和相对分子量测定等。第5页，共48页，星期日，2025年，2月5日瓶式离心机1）斜角式离心机是一类结构最简单的实验室常用离心机，指离心管腔与转轴成一定倾角的转子；角度越大，沉降越结实，分离效果越好，角度越小，颗粒沉降距离短，沉降速度快，但分离效果差。颗粒在角转子中沉降时，先沿离心力方向撞向离心管，然后再沿管壁滑向管底，因此管的一侧会出现颗粒沉积。第6页，共48页，星期日，2025年，2月5日2）平抛式离心机平抛式离心机一类结构简单的实验室常用的低中速离心机，转速一般在3000-6000rpm。转子活动管套内的离心管，静止时垂直挂在转头上，旋转时随着转子转动，从垂直悬吊上升到水平位置（约200—800rpm）。颗粒在水平转子中的沉降是沿管子轴向移动。样品便于收集受振动和变速搅乱后对流现象小，但转头结构复杂，最高转速相对要低容量也小一些。
第7页，共48页，星期日，2025年，2月5日平抛式离心机转子第8页，共48页，星期日，2025年，2月5日2离心沉降设备瓶式离心机也称平抛式离心机结构最简单的实验室常用的低，中速离心机，转速一般在3000-6000rpm。第9页，共48页，星期日，2025年，2月5日2离心沉降设备管式离心机液-液分离；液-固分离结构简单转速很高可连续操作（液-液）第10页，共48页，星期日，2025年，2月5日2离心沉降设备碟式离心机固体的沉降距离极短，分离效果较好。碟片间的距离一般为0.5~2.5mm,与被分离物料的性质有关。液-液分离；液-固分离连续操作第11页，共48页，星期日，2025年，2月5日2离心沉降设备多室式离心机增加了沉降面积，减少了沉降距离同时还有粒度筛分的作用常用于抗菌素液－液萃取分离间歇式生产第12页，共48页，星期日，2025年，2月5日管式离心机3离心沉降的计算ＨＲ０Ｒ１rz管壁第13页，共48页，星期日，2025年，2月5日沉淀分离第14页，共48页，星期日，2025年，2月5日概述沉淀（定义）是溶液中的溶质由液相变成固相析出的过程。沉淀具有选择性有选择地沉淀杂质有选择地沉淀所需成分优点：操作简单、经济、浓缩倍数高缺点：针对复杂体系而言，分离度不高、选择性不强第15页，共48页，星期日，2025年，2月5日概述沉淀操作常在发酵液经过过滤和离心（除去不溶性杂质及细胞碎片）以后进行。操作方式可分连续法或间歇法两种，规模较小时，常采用间歇法。不管哪一种方式操作步骤通常按三步进行：第16页，共48页，星期日，2025年，2月5日