食品分析检测技术主讲教师：林花食品智能加工技术模块三食品一般成分的检验
模块三食品一般成分的检验12维生素A的测定——高效液相色谱法维生素C的测定——荧光法目录CONTENTS
模块三食品一般成分的检验维生素A的测定——高效液相色谱法任务一
模块三食品一般成分的检验一、概述1、分类2、分析方法脂溶性：A、D、K、E水溶性：C、B化学分析法：比色法、滴定法仪器分析法：紫外、荧光、色谱法
模块三食品一般成分的检验二、维生素A的测定——三氯化锑比色法1.原理维生素A在三氯甲烷中与三氯化锑相互作用，产生蓝色物质，其深浅与溶液中所含维生素A的含量成正比。该蓝色物质在一定时间内于620nm波长处测定吸光度。2.试剂无水硫酸钠、乙酸酐、无水乙醚、无水乙醇、三氯甲烷、三氯化锑-三氯甲烷溶液、50%NaOH、Va标准液、酚酞指示剂
模块三食品一般成分的检验3.仪器和设备4.操作步骤（1）样品处理皂化法（皂化、提取、洗涤、浓缩）；研磨法（研磨、提取、浓缩）（2）测定标准曲线的制备：Va标准系列→三氯甲烷定容→标液1ml三氯甲烷+1ml标液→1d乙酸酐→迅速加入9ml三氯化锑-三氯甲烷→6s内测定A620样品测定：1ml三氯甲烷+1ml样品溶液→1d乙酸酐→迅速加入9ml三氯化锑-三氯甲烷→6s内测定A620空白：1ml三氯甲烷+1d乙酸酐→测定A620
模块三食品一般成分的检验5.计算式中 x——样品中维生素A的含量，μg／l00g（或国际单位，每国际单位＝0.3μg维生素A）；c——由标准曲线上查得样品中维生素A的含量，ug/mL；m——样品质量，g； V——提取后加三氯甲烷定量之体积，mL； 100——以每百克样品计。
模块三食品一般成分的检验6.说明及注意事项（1）本法为国家标准方法，适用于食品中维生素A的测定。（2）乙醚易发生乳化现象。在提取前洗涤操作中，不要用力过猛，若发生乳化，可加几滴乙醇消除乳化。（3）所用氯仿中不应含有水分。故在每lmL氯仿中应加入乙酸酐1滴，以保证脱水。（4）反应要在比色杯中进行，产生蓝色后立即读取吸光值。（5）若样品中含β-胡萝卜素干扰测定，可将浓缩蒸干的样品用正己烷溶解，以氧化铝为吸附剂，丙酮-己烷混合液为洗脱剂进行柱层析。（6）三氧化锑不能沾在手上，用过的仪器要先用稀盐酸浸泡后再清洗。
模块三食品一般成分的检验三、维生素D的测定——三氯化锑比色法（AOAC法）1.原理在三氯甲烷溶液中，维生素D与三氯化锑结合生成一种橙黄色化合物，呈色强度与维生素D的含量成正比。2.试剂3.操作步骤（1）样品处理：同Va测定①分离柱的制备。如图5-15所示。②纯化。图5-15层析装置
模块三食品一般成分的检验
模块三食品一般成分的检验（2）测定①标准曲线的绘制：Va标准使用液→三氯甲烷定容→标液1ml标液→1cm比色杯→立即加入3ml三氯化锑-三氯甲烷-乙酰氯→2m内测定A500②样品测定：1ml样品→1cm比色杯→立即加入3ml三氯化锑-三氯甲烷-乙酰氯→2m内测定A500空白：1ml三氯甲烷+3ml三氯化锑-三氯甲烷-乙酰氯→测定A500
模块三食品一般成分的检验4.结果计算式中x——样品中维生素D的含量，mg／100g；c——标准曲线上查得样品溶液中维生素D的含量，μg／mL；(如按国际单位，每国际单位＝0.025μg维生素D)；V——样品提取后用三氯甲烷定容之体积，mL；m——样品质量。
模块三食品一般成分的检验5.说明及注意事项（1）食品中维生素D的含量一般很低，而维生素A、维生素E、胆固醇、速甾醇等成分的含量往往都大大超过维生素D、严重干扰维生素D的测定，因此测定前必须经柱层析除去这些干扰成分。（2）操作时加入乙酰氯可以消除温度的影响，可使灵敏度比仅用三氯化锑提高约3倍，并可减少部分甾醇的干忧。（3）此法不能区分维生素D2和维生素D3，测定值是两者的总量。
模块三食品一般成分的检验四、维生素E的测定——比色法1.原理维生素E能将高铁离子还原为低铁离子，低铁离子与α，α′-联氮苯发生颜色反应，可以进行比色测定。2.试剂3．操作步骤（1）样品处理①皂化；②纯化。（2）样品测定（3）标准曲线的绘制4.计算结果同维生素A的测定。1国际单位维生素E相当于1.1mgα-维生素E。
模块三食品一般成分的检验5.说明及注意事项（1）在皂化时，用氮气流保护，也可加入焦性没食子酸作为抗氧化剂，防止维生素E的氧化。（2）此法反应没有特异性，故处理前应将其他还原性物质除去。（3）也可采用4，7-二苯基-1，10-菲绕啉作为发色剂，其灵敏度比α，α′-联吡啶高2.4倍。（4）维生素E的各种异构体与试剂的反应速度、呈色强度各不相同。