第1页，共40页，星期日，2025年，2月5日首先回顾几个问题HPLC方法的主要特点有那些？HPLC的主要设备分哪几部分？第2页，共40页，星期日，2025年，2月5日HPLC方法的主要特点分离效率高，选择性好，适于各种多元组分复杂化合物的分离;应用范围广：无机物—有机物，天然物质—合成产物，小分子---大分子，一般化合物到生物活性物质;分离机理各异，色谱柱、淋洗体系和操作参数选择广泛;分离纯化+分析检测;样品量从痕量到大规模制备，实现在线监测和自动化操作。第3页，共40页，星期日，2025年，2月5日HPLC的关键设备专用的高压输液系统;高灵敏检测系统;高效分离柱其中分离柱是色谱的中心,是最为关键的部分第4页，共40页，星期日，2025年，2月5日与经典色谱的比较第5页，共40页，星期日，2025年，2月5日第6页，共40页，星期日，2025年，2月5日HPLC分离填料：有机基质多糖型凝胶高聚物树脂无机基质硅胶氧化锆氧化铝多孔玻璃羟基磷灰石石墨化碳黑基质微球——天然多糖或合成单体或交联剂负载样品的能力强，色谱容量高耐酸碱、具化学稳定性，柱寿命长，易再生不易产生非特异性吸附作用第7页，共40页，星期日，2025年，2月5日一、HPLC色谱柱的关键在于填料物理结构→色谱动力学（粒度与粒度分布、孔径与孔径分布、颗粒强度和表观形态→柱效率、穿透性）化学结构→色谱热力学（连接在基质上的官能团或链段→样品保留值、选择性）第8页，共40页，星期日，2025年，2月5日1、HPLC色谱柱填料在物理结构上的要求:颗粒大小合适，粒度分布较窄;颗粒强度适应高速高压操作;多孔型的填料孔径大小和孔径分布适宜,避免复杂的微孔结构;一定的溶胀及收缩水平。第9页，共40页，星期日，2025年，2月5日常见的液相色谱填料类型多孔型非多孔型薄壳型分：小孔（10nm）、中孔（10-30nm）、大孔（30nm）和超大孔（100nm），应用占主导地位整体颗粒无孔颗粒表面层多孔，内部无孔。以合成树脂为基质的产品，颗粒在10μm左右以合成树脂为基质的产品，颗粒7μm以多糖凝胶为基质的产品，颗粒都20μm左右同左第10页，共40页，星期日，2025年，2月5日目前的主要发展方向(研究热点):颗粒单分散的填料;贯穿性超大孔结构的填料;小颗粒的非多孔填料。第11页，共40页，星期日，2025年，2月5日2、HPLC色谱柱填料在化学结构上的要求特定的选择性;良好的化学稳定性及热稳定性;避免不可逆吸附。不同填料的化学结构是通过对基质材料的化学改性而实现的。第12页，共40页，星期日，2025年，2月5日离子交换色谱填料颗粒表面携带季铵基、DEAE基、磺酸基、羧基等强弱阴阳离子集团。反相色谱填料C18、C8烷基等疏水性集团正相色谱填料羟基、氨基、氰基等弱疏水性集团亲和色谱填料蛋白质、抗体、激素、抗菌素、酶等具有生物特异性的配基第13页，共40页，星期日，2025年，2月5日二、有机高分子类型的HPLC填料基质树脂基质材料决定填料物理结构和化学结构:颗粒大小与分布,颗粒强度,孔径大小,孔结构形态,颗粒内部的化学结构及其稳定性,直接影响对颗粒的表面(包括内孔表面)的化学修饰。可分为:多糖型聚合物型第14页，共40页，星期日，2025年，2月5日（一）多糖型基质材料1.葡聚糖系:高交联的羟丙基化葡聚糖,其颗粒刚性好,粒度小而且分布范围窄（10~23μm）;SephasorbHPUitrafine用于中低压色谱和高效色谱烯丙基葡聚糖与N,N`-亚甲基双丙烯酰胺交联共聚而成的凝胶。Sephacryl系列(S-100HR,S-200HR,S-300HR)属于高效凝胶，较高流速下使用第15页，共40页，星期日，2025年，2月5日2.琼脂糖系:Sepharose与2,3-二溴丙醇反应生成琼脂糖凝胶SepharoseCL(CL-2B,CL-4B,CL-6B)高度偶联琼脂糖凝胶SepharoseFastFlow(Sepharose6FF,Sepharose4FF)高效琼脂糖凝胶SepharosehighPerformanceSuperdax(葡聚糖与交联琼脂糖的结合)：快流速Superose(珠状琼脂糖经两次交联)：高效凝胶第16页，共40页，星期日，2025年，2月5日（二）聚合物型基质材料交联聚苯乙烯树脂:苯乙烯与二乙烯苯的交联共聚物(PS-DVB)，是应用最为广泛的一类基质树脂。交