第二十章
常用生物化学和分子生物学技术;目
录;学习目标;第一节印迹杂交技术;印迹杂交技术：
将电泳分离的生物大分子样品（DNA、RNA和蛋白质）从凝胶中转移结合于固相膜上，然后与标记探针进行杂交并加以检测分析的技术
应用：
克隆筛选
核酸分析
蛋白质分析
基因诊断
……;电泳：利用凝胶电泳分离样品
印迹：将电泳凝胶中的待测样品转移到合适的固相膜上
探针：
带有标记物且序列已知的核酸片段
作用：与待测核酸中的特定序列形成可检测的杂交体
种类：基因组DNA探针、RNA探针、cDNA探针和寡核苷酸探针
杂交：用探针与固相膜上的待测核酸样品进行杂交
检测分析：通过放射自显影或化学显色反应等方法分析印迹膜上的杂交体;二、常用印迹杂交技术;第二节生物芯片技术;原理
种类
基因芯片
蛋白质芯片
细胞芯片
组织芯片;第三节聚合酶链反应;聚合酶链反应
又称PCR技术，是在体外模拟体内DNA复制的过程，获得大量DNA的技术。
;一、PCR的原理;（一）PCR的反应体系;;二、常用PCR衍生技术及其应用;原理：以RNA为模板，在逆转录酶的作用下合成cDNA，并以之为模板通过PCR反应来扩增目的基因。
应用：常用于基因表达研究、cDNA克隆、cDNA探针制备、RNA高效转录体系构建、基因诊断、RNA病毒检测等。
;原理：引入荧光标记分子，并使荧光信号强度与PCR产物量成正比，对每一反应时刻的荧光信号进行实时分析，即可计算出PCR产物量。
;第四节DNA测序技术;第一代：双脱氧链终止法
第二代：高通量、大规模测序技术
第三代：单分子实时测序技术
第四代：纳米孔测序技术
;DNA聚合酶
待测序DNA
引物、dNTP;双脱氧链终止法示意图;二、第二代测序技术;三、第三代测序技术;四、第四代测序技术;第五节重组DNA技术;主要步骤;一、目的DNA的制备;载体;三、重组DNA的构建;（一）目的DNA和载体的切割;（二）目的DNA和载体的连接;四、细胞转化及筛选;常用转化方法与宿主细胞;重组DNA筛选;蓝白筛选;表达产物分析;五、目的基因的表达;六、重组DNA技术的应用;第六节转基因技术和基因靶向技术;转基因技术
把一种生物的特定基因作为外源基因整合到没有该基因的另一种生物的基因组中，使其获得新的性状并稳定地遗传给子代的基因操作技术
;学习小结;复习思考题;谢谢观看