第1页，共33页，星期日，2025年，2月5日斜面沙土管冷干管液氮管实验室种子制备生产现场种子制备二级斜面一级斜面米孢子母瓶子瓶一级种子罐发酵罐二级种子罐三级种子罐菌种保藏生产种子制备的一般流程第2页，共33页，星期日，2025年，2月5日几个概念1.种子罐级数：种子在种子罐中需扩大培养的次数。种子罐级数确定根据：（1）菌种生长特性（2）孢子数量（3）孢子发芽及菌丝繁殖速度（4）发酵罐的接种量2.发酵级数：种子罐的级数加一。二级发酵，即一级种子扩大培养，如青霉素，四环素；三级发酵，即二级种子扩大培养，如红霉素、庆大霉素；四级发酵，即三级种子扩大培养，如链霉素。种子级数愈少，愈有利于简化工艺和控制，并减少了因多次接种而产生污染的机会。第3页，共33页，星期日，2025年，2月5日3.接种龄：生产种子的培养时间，即指种子罐中培养的菌丝体开始移入下一级种子罐或发酵罐的培养时间。接种龄以菌丝处于生命力极为旺盛的对数生长期，且培养液中菌体量还未达到最高峰时为宜。4.接种量：指移入的种子液体积与接种后培养液体积比例。最适接种量为7~15%。第4页，共33页，星期日，2025年，2月5日第二节种子制备一、斜面种子的制备1.斜面种子：在试管或扁瓶内，以琼脂固化的培养基表面上生长的菌种培养物。2.制备流程：3.制备过程注意事项：(1)?琼脂要完全浸没在营养液内,用量1.0%-2.5%(2)营养液中最好不含易沉淀的固形物；(3)装量掌握在斜面顶端不超过试管或扁平长度的2/3；(4)灭菌后垂直放置至稍冷后再斜放，以减少冷凝水(5)微量元素先配制成一定的溶液，用移液管定量加入第5页，共33页，星期日，2025年，2月5日在无菌间超净工作台进行接种操作第6页，共33页，星期日，2025年，2月5日3.质量检查（1）外观检查（菌落的形态、色泽、稀密度、孢子量、色素分泌）（2）无菌检查（3）摇瓶生产能力检查第7页，共33页，星期日，2025年，2月5日4.影响斜面种子质量的因素(1)原材料质量，水质，培养基pH(2)灭菌条件(3)接种量(4)培养室温度、湿度、通风(5)培养时间(6)有害气体或挥发物（培养室内不要安紫外灯）(7)冷藏条件第8页，共33页，星期日，2025年，2月5日二、米粒种子（米孢子）1.米孢子：将霉菌或放线菌接种到灭菌后的大米或小米颗粒上，恒温培养一段时间后产生的分生孢子。2.米孢子制备工艺流程3.?制备过程注意事项（1）浸泡时间及加营养液量应掌握在灭菌后米粒熟透但不粘连；（2）分装量应掌握在平铺后有2-3粒米的厚度（3）米粒不要碰到瓶塞；（4）培养前期应经常摇动米粒，使微生物在米粒表面生长均匀，气生菌丝及孢子长成后不再摇动。（5）保存：冰箱保存；真空干燥保存；10%-20%甘油浸泡保存第9页，共33页，星期日，2025年，2月5日第10页，共33页，星期日，2025年，2月5日4.质量标准
（1）无杂菌污染（2）孢子数足够，发芽率高（3）生产能力高(4)真空干燥后含水量小于10%5.影响质量的因素及控制（同前）三、种曲（培养材料用麸皮、米糠等，其余同米粒种子）
第11页，共33页，星期日，2025年，2月5日四、摇瓶种子1.摇瓶种子:将斜面种子或米孢子接种于锥形摇瓶内的液体培养基中，在摇床上振荡培养得到的液体种子。2.制备流程:3.制备过程注意事项培养基营养成分含量应较斜面丰富，以确保一定的营养菌体生长量；能保持生长过程中pH稳定。培养基装量适当，以保证良好的通气并与发酵罐通气条件相适应；参考装量为40-50ml/250ml瓶，60-80ml/500ml瓶，90-110ml/750ml瓶，120-150ml/1000ml瓶；如果是厌氧培养，则装量应增加一倍以上；3)灭菌时要注意不要让蒸汽冷凝水打湿或粘污培养基在瓶塞或纱布上4）注意摇床转速，转速越快，偏心距越大，通气越好。经常检