酶解工艺条件正交试验考察以多糖含量和蛋白含量作为评价指标,通过SAS软件处理数据,结果表明,影响因素的各水平间的总多糖和蛋白含量无差异。直观分析与综合考虑,酶解温度选择45℃,酶解时间选择2h,胰酶用量选择4×10-4:1。*第62页,共95页,星期日,2025年,2月5日海参多糖(SCAMP)中的刺参多糖有两类:1、海参糖胺聚糖或粘多糖(HG),由D-N-乙酰氨基半乳糖、D-葡萄糖醛酸、L-岩藻糖构成直链多糖(有分支的杂多糖),其水溶液分子中带有阴离子,呈酸性,分子量(4~15)×104Da;2、海参岩藻多糖(HF),由L-岩藻糖构成的直链多糖,分子量(8~10)×104Da。两种多糖虽然组成的糖基不同,但在糖链上都有部分羟基硫酸酯化,且硫酸酯基占多糖含量均在32%左右。约占体壁干重的6%*第63页,共95页,星期日,2025年,2月5日几种海参多糖的糖基组成及部分性质*第64页,共95页,星期日,2025年,2月5日抗凝血作用SJAMP有明显的抑制血小板解聚的作用,使血小板产生自发性聚集,使血液循环中血小板的数量明显减少,但不影响血小板形态、代谢上的变化,仅影响血小板原有的生理功能。SJAMP直接作用于血液中的凝血酶,影响凝血酶活性,加速凝血酶活性的衰减过程。SJAMP促进纤溶酶活性,直接降解纤维蛋白原;抑制纤维蛋白聚集功能,影响单体聚集过程;改变纤维蛋白凝胶结构,从而增强其对纤维酶的敏感性而被清除。海参多糖的生物活性刺参酸性粘多糖SJAMP、玉足海参酸性粘多糖HL-P、岩藻糖化硫酸软骨素FCS*第65页,共95页,星期日,2025年,2月5日FCS在一定剂量下抗凝血作用比肝素强。它是通过诱导血管内皮细胞膜糖胺聚糖活性改变,从而改变血浆抗凝血活性。也有明显的抗血栓活性。HL-P的抗凝血活性与SJAMP相似。SJAMP、FCS的抗凝血、抗血栓作用机制与传统抗凝药肝素不同。肝素的抗凝血作用依赖于抗凝血酶Ⅲ(AT-Ⅲ),SJAMP对凝血过程的影响主要表现为延长凝血酶时间,作用依赖于肝素辅因子Ⅱ(HC-Ⅱ)。故SJAMP、FCS有可能用于治疗减少而抗凝治疗血栓性疾病,成为新型的抗凝药物。*第66页,共95页,星期日,2025年,2月5日抗肿瘤作用海参酸性粘多糖抗肿瘤作用主要是通过增强单核-巨噬细胞系统的活性实现的。研究表明HL-P能明显增加小鼠脾脏的重量,提高腹腔巨噬细胞的吞噬百分率及吞噬指数,并能对抗免疫抑制剂引起的免疫功能低下。SJAMP能显著抑制小鼠乳癌和S-180肿瘤细胞DNA的合成,对荷瘤小鼠正常肝细胞的DNA合成有促进作用。推测SJAMP对荷瘤小鼠的肿瘤细胞和正常细胞有一定的选择性。*第67页,共95页,星期日,2025年,2月5日增强免疫力刺参酸性粘多糖能使人的白细胞悬浮物中的E花环数量增加,EAC花环和SmIg的表达增强。推测是因为多糖作用于无活性细胞亚群,致使活性的T细胞增加,T抑制细胞数量也就增加,从而增强了B细胞活化和Smlg的表达。玉足海参多糖能明显增加小鼠脾脏重量,促进机体对血中碳粒的吞噬速率,增强机体单核-巨噬细胞系统的吞噬功能,是一种作用较强的免疫促进剂,可用于肿瘤病人的辅助治疗。*第68页,共95页,星期日,2025年,2月5日壳聚糖是甲壳质的脱乙酰产物,也是一种天然存在的生物多糖。它具有生物相容性、生物降解性,无毒副作用,无异味,而且其分子中的氨基和羟基性质活泼,能与多种有机物发生反应,进行化学改性,得到多种具有独特功能的衍生物,因此在许多领域中都获得了重要的应用。*第30页,共95页,星期日,2025年,2月5日抑菌机理:壳聚糖为聚阳离子,能与细菌表面产生的酸性物质,如脂多糖、磷壁质酸、荚膜多糖、蛋白质等相互作用,使其膜功能紊乱。电镜观察证明:细菌经壳聚糖作用后发生形态变化——革兰氏阳性菌,如金黄色葡萄球菌细胞壁变薄及破损,复制受到抑制;革兰氏阴性菌如大肠杆菌,细胞质浓缩,空隙明显扩大;白色念珠菌细胞壁仍然存在,但细胞内结构消失或分布异常。*第31页,共95页,星期日,2025年,2月5日2、增强机体免疫功能(1)提高NK细胞和LAK细胞细胞的活性NK细胞和LAK细胞是广谱的抗瘤免疫细胞,其杀伤作用与内环境的pH关系密切,在pH=7.4左右最活跃。pH↓,活性↓,非特异性免疫功能受抑制。壳聚糖能吸附H+、Cl-,提高HCO3-浓度,从而改善内环境,同时壳聚糖也是一种免疫活化剂。资料显示:动物服用壳聚糖后