项目2芦荟的组培快速繁殖主讲人:吕曼根培养继代培养炼苗初代培养任务
任务一、初代培养3.1、愈伤组织培养定义原理愈伤组织(callus):离体组织或器官进行离体培养时,进行细胞分裂,形成一种高度液泡化的无定形的薄壁细胞。愈伤组织培养:将外植体(explaut)在无菌条件下接种到培养基上,进行愈伤组织诱导、生长和发育的一门技术。细胞全能性(celltotipetency):植物细胞具有全套遗传信息,在特定环境条件下能进行表达,而产生一个独立完整的植株个体。脱分化:一个成熟细胞转变为分生状态的过程。恢复细胞的分裂活性。再分化:经脱分化的组织或细胞在一定的培养条件下转变为各种不同细胞类型的过程。
任务一、初代培养3.1、愈伤组织培养形成条件脱离母体植株:摆脱了原来所受到的遗传上的控制和生理上的制约;一定的培养条件:最重要的是激素的种类和浓度;(2,4-D)内源激素水平:外植体的类型和外植物体原来在植株上所处的位置。
任务一、初代培养3.1、愈伤组织培养形成过程外植体中已分化的活细胞,在外源激素的诱导下通过脱分化后形成愈伤组织,这一过程被大致划分为三个时期:诱导期分裂期形成期
任务一、初代培养3.1、愈伤组织培养诱导期(起始期)细胞分裂的准备期特点:(1)细胞大小变化不大,外观无明显特征(2)细胞内物质代谢旺盛,RNA含量迅速增加,细胞核体积明显增大诱导期的长短,因植物种类、外植体的生理状况和外部因素而异,如胡萝卜的诱导期要几天,新鲜的菊芋块茎则只要22h,但菊芋块茎经过5个月的贮藏后,诱导期则须延长到40h以上。
任务一、初代培养3.1、愈伤组织培养分裂期外植体细胞经过诱导以后脱分化,不断分裂增生子细胞的过程特点:(1)细胞的数目迅速增加,但平均鲜重下降(2)细胞体积小,无液泡。如同根尖和茎尖的分生组织细胞特性(3)细胞的核及核仁增大到最大(4)细胞中RNA含量减少,而DNA含量保持不变
任务一、初代培养3.1、愈伤组织培养形成期(分化期)是指外植体经过诱导期和分裂期后形成了无序结构的愈伤组织进行分化并形成器官的时期。特点:(1)细胞的平均大小相对稳定(2)细胞分裂由原来局限在组织外缘分裂转为组织内部较深层局部细胞的分裂(3)形成分生组织结节。瘤状或片状的拟分生组织,分生组织结节可以成为愈伤组织的生长中心(4)形成维管组织结节。由分生组织结节外围的细胞作平周分裂形成层状细胞,并形成了部分维管组织如管胞、纤维细胞等,但不形成维管系统(5)形成不同形态和功能的细胞,因此有人又将此期称为分化期。
任务一、初代培养3.1、愈伤组织培养优良的愈伤组织高度的胚性或再分化能力容易散碎旺盛的自我增殖能力经过长期继代保存而不丧失胚性
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