环境微生物学试验报告
试验一光学显微镜的使用及原核微生物、真核微生物的观看
一、试验目的
了解一般光学显微镜的构造及原理，把握显微镜的操作及保养方法。
观看、识别几种原核微生物。真核微生物的个体形态，学会生物图的绘制。
二、试验器皿与材料
器皿：显微镜、擦镜纸、二甲苯。
材料：示范片：细菌三形〔球状、杆状、螺旋状〕、弧状〔硫酸盐复原菌〕、丝状〔浮游球衣菌等〕、细菌鞭毛及细菌荚膜。放线菌、颤蓝细菌、微囊蓝细菌或念珠蓝细菌等。
三、试验步骤
将标本片放在载物台上，使观看的目的物置于圆孔正中心。
将镜头换成低倍镜，将粗调整器向下旋转〔或载物台向上旋转〕，眼睛注视物镜。当物镜的尖端距离载玻片约0.5cm处时停顿旋转。
左眼对着目镜观看，将粗调整器向上旋转，假设见到目的物，但不格外清楚，可用细调整器调整，直至目的物清楚。此时找到目的物并移至中心。
换成高倍镜，观看目的物，旋转细调整钮，直至视野清楚。
观看示范片，绘出其形态图。四、思考题
使用油镜时，为什么要先用低倍镜观看？答：为了找到目的物并移动到中心。
要使视野光明，除承受光源外，还可实行哪些措施？
答：调大孔径光阑，调整光源。假设是用反光镜的显微镜，用凹面镜可使视野光明。
五、生物图
试验二、微生物培育基的配制与灭菌
一、试验目的
生疏玻璃器皿的洗涤和灭菌前的预备工作。
了解配置微生物培育基的根本原理，把握配置、分装培育基的方法。
学会各类物品的包装、配置〔稀释水等〕和灭菌技术。二、试验器皿与材料
试验器皿：高压蒸汽灭菌器、枯燥箱、煤气灯、培育皿、试管、刻度移液管、锥形瓶、烧杯、两桶、药物天平、玻璃棒、玻璃珠、石棉网、药匙、铁架、外表皿、pH试纸和棉花等。
材料：牛肉膏、蛋白胨、NaCl、NaOH和琼脂等。三、试验原理
培育基是微生物生长的基质，是依据微生物养分、生长生殖的需要，由碳、氢、氧、氮、磷、硫、钾、钠、钙、镁、铁及微量元素和水，按肯定的体积分数配置而成。调整适宜的pH，经高温灭菌后以备培育微生物之用。
由于微生物种类及代谢类型的多样性，因而培育基种类也多，它们的配方及配制方法也各有差异，但一般的配制过程大致一样。
四、试验步骤
1、取100mL蒸馏水倒入锥形瓶；
2、称取牛肉膏0.5g，蛋白胨1g，NaCl0.5g，琼脂20g；
3、用100g/LNaOH调整pH至7.2~7.4；
4、盖上棉塞，121℃下灭菌15~20min。五、思考题
1、固体培育基加琼脂后加热溶化时要留意哪些问题？
答：〔1〕加热器功率不能太高，也不能太低。太高，简洁沸腾和把培育基烧焦；太低，培育基简洁凝固。
受热要均匀，可以垫上石棉网，要用玻璃棒不停缓慢搅拌。
加热完毕后，要在适宜的温度〔60℃左右〕倒平板，防止凝固。
2、培育基中加琼脂的作用是什么？
答：琼脂的作用就是让培育基凝固。
3、如何检查培育基灭菌是否彻底？
答：将灭菌后的培育基按灭菌锅内不同位置,每处抽取数管标号,置25至30
摄氏度培育一周左右进展检查,假设培育基无什么变化说明灭菌效果较好
试验三、细菌的革兰氏染色
一、试验目的
了解细菌的涂片及染色在微生物学试验中的重要性。
学会细菌染色的根本操作技术，从而把握微生物的一般染色法和革兰氏染色法。
二、染色原理
微生物细胞由蛋白质、核酸等两性电解质及其他化合物组成。所以，微生物表现出两性电解质的性质。两性电解质兼有碱性基和酸性基，在酸性溶液中解离出碱性基，呈碱性带正电；在碱性溶液中解离出酸性基，呈酸性带负电。经测定，细菌等电点〔pI〕在2~5之间时，大多以两性离子存在，当细菌在中性、碱性或偏酸性溶液中时，细菌带负电荷，所以简洁与带正电荷的碱性染料结合，故用碱性染料染色的为多。
微生物体内各构造与染料结合力不同，故可用各染料分别染微生物的各构造以便观看。
三、试验器皿、试剂、材料
器皿：显微镜、接种环、载玻片、酒精灯。
试剂：草酸铵结晶紫染液、革兰氏碘液、体积分数为95%的乙醇、质量浓度为5g/L的沙黄染色液等。
材料：枯草杆菌、大肠杆菌。四、试验步骤
涂片：载玻片 滴一滴蒸馏水 蘸菌染匀 自然枯燥
初染：用草酸铵结晶紫染液染色1~2min后水洗
媒染：用革兰氏碘液染色1~2min后水洗
脱色：滴加体积分数为95%的乙醇，约45s后水洗
复染：滴加番红染色2~3min后水洗并枯燥
镜检：用显微镜观看菌体形态五、思考题
〔1〕要得到正确的革兰氏染色结果必需留意哪些操作？关键在哪几步？为什么？
答：应留意枯燥时不要用火烧太久。关键在于涂片，涂片的时候要留意涂均匀，并且两个菌的量也要差不多，否则太厚的地方脱色就不均匀了。
试验四、总大肠菌群的检验
一、试验目的
了解总大肠菌群的数量指标