糊化度的测量方法
在不同的单元操作中,糊化度依次为:挤压〔糊化度80%~95%以上〕,膨胀〔糊化度为80%左右〕,蒸煮〔糊化度为70%~80%〕压缩〔估量糊化度为60%~70%〕,加工本钱的排列挨次则相反。所以,在谷物食品的工业生产中,糊化度的测量确定和掌握是至关重要的。淀粉糊化后,其物理、化学特性会发生很大变化,如双折射现象消逝、颗粒膨胀、透光率和粘度上升等,所以糊化度的测定方法也有多种,如双折射法、膨胀法、酶水解法和粘度测量法等。不同的测定方法,得到的糊化度值会有相当大的差异,这是由于测定根底和基准等不同,产生差异是必定的。当前比较认同的方法是酶法,其次是染料吸取法中的碘电流滴定法。酶法又分为淀粉糖化酶法、葡萄糖淀粉酶法及β-淀粉酶法等,其根本原理都是利用各种酶对糊化淀粉和原淀粉有选择性的分解,通过对生成物的测量得到准确的糊化度。
葡萄糖淀粉酶法
通常,糊化淀粉简洁被淀粉酶消化,因此可用消化相对百分率来准确计算糊化度。
仪器与试剂
搅拌器,玻璃均质器,l~2ml移液管,恒温水浴,台式离心机。
99%乙醇,2mol/L醋酸缓冲液〔pH4.8〕,10mol/L氢氧化钠,2mol/L醋酸,
2.63μ/ml葡萄糖淀粉酶液,0.025mol/L盐酸。
测定步骤
试样的调制:试样20g〔或20ml〕,参加200ml浓度为99%的乙醇,投入高速旋转的家用混合器中连续旋转1min,使之快速脱水。生成的沉淀用3号玻璃过滤器抽滤,用约50ml浓度为99%的乙醇,接着用50ml乙醚脱水枯燥后,放在氯化钙枯燥器中,以水力抽滤泵减压枯燥过夜,用研钵将其轻轻粉碎,仍保存在同样的枯燥器中备用。
操作
将100mg上述的枯燥试料放入磨砂协作的玻璃均质器中,加8ml蒸馏水,用振动式搅拌机搅拌至根本均匀为止。接着将均质器上下反复几次,使之成为均匀的悬浮液。再用振动式搅拌机均匀化,随即各取悬浮液2ml注入2只容量为
20ml的试管中,分别用作被检液和完全糊化检液。向被检液试管加2mol/L醋酸缓冲液〔pH4.8〕1.6ml和水0.4ml,而向完全糊化检液试管添加10mol/LNaOH溶液0.2ml,在证明已于室温下完全溶解之后,加2mol/L醋酸1.6ml〔酸的添加量需预先通过试验打算,其量为使pH调至4.8时所用的醋酸量〕。最终加水使容量为4ml。将这2只试管放在37℃的恒温槽中预保温数分钟后,添加酶液lml,每隔10~5min振荡1次,共反响60min。然后,将反响液0.5ml参加预先放10ml0.025mol/L盐酸〔起停顿反响的作用〕的锥底离心管中,上下振荡数次,在转速为3000r/min的离心机中分别10min。取上层清液0.5ml,用蒸馏水稀释1倍,用Somogyi-Nelson法〔见后〕或适当的方法定量复原糖,并从下式求出a化度:a化度〔糊化度〕=[被检液的光密度〔或糖量〕/完全a化检液的光密度〔或糖量〕]×100%。
市售的玻璃均质器磨砂协作是硬性的协作,需用150或400目的金刚砂来调整协作。均质器的协作,以在枯燥状态下磨砂协作棒能缓慢地自然落下者为好。
葡萄糖淀粉酶用的是内孢霉或黑曲霉的粗酶。酶活力以在pH4.8的醋酸缓冲液〔0.2mol/L〕中,在37℃能将0.2%的可溶性淀粉生成1hg分子葡萄糖的酶量作为1个单位〔U〕。
Somogyl-Nelson法
试剂
A液:25g无水碳酸钠,25g酒石酸钾钠,20g碳酸氢钠,200g无水硫酸钠参加800ml水中,使之溶解并定容成1L。必要时则需过滤。
B液:30g结晶硫酸钠〔CuSO4.5H2O〕溶于200ml含4滴浓硫酸的水中。C液:25g钼酸胺溶于450ml预先添加2lml浓硫酸的水中。3g砷酸氢二钠
〔Na2HAsO4.7H2O〕溶解于25ml水中,并将此溶液渐渐地参加不断搅拌下的上述水溶液中,然后稀释至500ml。将此溶液置于55℃水浴上留神保温30min,或在37℃放置过夜。
取上述经酶液处理过的完全a化的检液和被检液各0.5ml,分别用蒸馏水稀释1倍后,加到配制的1.0mlC液。〔1.0mlB液加到25mlA液中〕,总容积为
2.0ml。混合液在沸水中放置20min,接着用冷的流水冷却5min,然后参加1.0mlC试剂,使其充分混合,直到混合液不放出CO2气为止。静置10min后,用水稀释至25ml。用装上绿色滤光片的比色计测定,或用分光光度计测定520nm波
特长的光密度。用麦芽糖作标准曲线,