一、标准制定任务的来源和目的
鞘翅目Coleoptera象甲科Curculionidae仓储害虫是一类
危害严重的初期性害虫,它们前期会蛀噬粮食,继而引起次
生性害虫危害和霉变发生,其繁殖速度快、耐饥力强,一对
象甲一年可繁殖80万头以上的害虫,防控难度大。该科包
括阔鼻谷象Caulophilusoryzae(Gyllenhal)、罗望子象
Sitophiluslinearis(Herbst)、谷象Sitophilusgranaries
(Linnaeus))、米象Sitophilusoryzae(Linnaeus)和玉米象
Sitophiluszeamais(Motschulsky),它们成虫形态非常相似,
传统方法很难鉴别,且其卵及幼虫均藏匿在粮粒之中,具有
很强的隐匿性,成虫活动速度快,难于捕捉,虫口密度低的
时候粮堆中更容易发现其害虫碎片。基于此,对此类害虫的
早发现及高效、精准识别,是实现虫害早期预警及有效防控
的前提和基础。但传统形态识别技术以成虫形态为依据,需
要严格的专业知识学习培训,效率不高,同时也很难实现对
未成熟虫态(卵、幼虫及蛹)及残损样品的鉴别。
现代分子技术的发展,尤其是基于COI基因的DNA条
形码分子鉴别技术的出现和完善,为物种准确快速鉴别开辟
了新方法,同时从基因水平反应物种的进化关系,提高物种
鉴别效率、发现新种和隐存种等方面都具有重要应用价值。
为解决仓储象甲害虫监测预警及防控中的识别问题,通
过对需求调研和对仓储象甲害虫标准化基因DNA条形码分
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子技术的研究,宜宾市标准化促进会提出并制定了《象甲科
仓储害虫分子鉴别技术规程》。
二、标准起草过程
根据对标准起草的相关要求,组成了《象甲科仓储害虫
分子鉴别技术规程》标准起草小组。起草小组前期对多地区
储粮虫害情况进行调研,分析不同地区不同气候害虫种类。
了解象甲类害虫生存适宜条件和象甲类储粮害虫现状,对国
内外象甲储粮害虫种类以及生存特点进行分析对比,确定象
甲类害虫在储粮中的高发性和强害性,并针对象甲储粮害虫
的鉴别困难性提出标准起草的进一步要求,为下一步《象甲
科仓储害虫分子鉴别技术规程》的起草提供了坚实的基础和
技术导向。
起草小组在前期调研资料和产品检测报告综合分析的
基础上,着手起草了《象甲科仓储害虫分子鉴别技术规程》
(征求意见稿)。相关人员及专家对起草小组提交的标准征
求意见稿进行充分研究讨论,根据实际检验检测结果的准确
性以及检测流程的简洁和高效性进行评估,在对征求意见稿
进行修改完善的基础上,最终完成标准的编制工作,并由起
草小组编写地方标准编制说明。
三、标准制定依据
1)《中华人民共和国标准化法》
2)《国家标准化管理委员会民政部关于印发团体标
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准管理规定的通知》
3)《四川省标准化监督管理条例》
4)《四川省地方标准管理办法》
5)《宜宾市标准化促进会团体标准管理办法》
4)GB/T6682分析实验室用水规格和实验方法。
四、标准框架和基本内容
标准编制遵循“实事求是、科学合理、公正客观、标准统一”的原则,着力
强调《象甲科仓储害虫分子鉴别技术规程》的科学性、先进性和适用性。
(一)标准框架
本标准共包括6章,分别为范围、主要技术内容、工作原理、仪器设备及试
剂、DNA条形码分子鉴定、结果判断。
(二)标准范围
本标准适用于单头仓储象甲害虫DNA分子鉴别。
(三)基本内容
1.仪器设备及试剂
规定了象甲害虫DNA分子鉴定的仪器设备和试剂用量
规格的要求。
2.基因组DNA的提取以及质量鉴定
规定了象甲害虫基因组DNA分子提取的操作要求,以
及象甲害虫基因组DNA提取质量的检测方法。
3.条形码COI基因的扩增及检测
规定了仓储象甲条形码COI基因扩增使用引物对,从
PCR反应体系、扩增条件、产物检测三个方面对条形码COI